Müeller Hinton Agar Apa adanya, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Müeller Hinton Agar Ini adalah media nutrisi yang solid dan tidak selektif, yang terdiri dari infus daging, asam pepton kasein, pati, pegangan dan air suling. Media ini memungkinkan perkembangan mikroba yang sangat baik dari bakteri pertumbuhan paling cepat.

Awalnya diciptakan oleh John Howard Müeller dan Jane Hinton untuk mengisolasi bakteri yang menuntut dari sudut pandang nutrisi, seperti Neisseria Gonorrhoeae Dan Neisseria meningitidis. Namun, karena karakteristiknya ternyata ideal untuk studi kerentanan terhadap antibiotik, memberikan hasil yang dapat diandalkan dan dapat direproduksi.

Oleh karena itu, agar Müeller Hinton adalah media kultur yang diterima oleh Institut Standar Klinis dan Laboratorium (CLSI) dan Komite Eropa tentang Pengujian Kerentanan Antimikroba, untuk pelaksanaan uji kerentanan antimikroba dengan metode disseminasi Kirby dan Bauer.

Dasar

Karena ini adalah media nutrisi non -selektif, sangat baik untuk pertumbuhan sebagian besar bakteri patogenik.

Di sisi lain, komposisinya yang sederhana menyebabkan zat -zat dengan mudah menyebar, menjadi karakteristik penting untuk uji kerentanan dengan metode diseminasi disk.

Karakteristiknya yang lain adalah mengandung jumlah inhibitor yang rendah, yang memungkinkan sulfonamide, trimetoprim dan tetrasiklin untuk mengevaluasi secara efektif.

Namun, harus diingat bahwa media harus memenuhi kondisi tertentu untuk menjamin fungsi yang tepat, termasuk:

Kesesuaian pH, kedalaman agar dan konsentrasi Timina, Timidina, CA yang tepat⁺⁺, Mg⁺⁺ dan zn⁺⁺.

Anda juga harus tahu bahwa metodologi standar dan karenanya semua parameter, seperti:

Konsentrasi inokulum, konsentrasi dan konservasi cakram antibiotik, penempatan jumlah cakram yang tepat pada agar, jarak antara satu cakram dan yang lainnya, penempatan strategis antibiotik tertentu, atmosfer, suhu dan waktu inkubasi.

Persiapan

Beratnya 37 gr dari medium müeller hinton mengalami dehidrasi dan larut dalam 1 liter air suling. Panaskan lingkungan sambil mengaduk untuk membantu pembubaran Anda. Rebus selama 1 menit.

Bawa ke autoclave untuk mensterilkan pada 121 ° C selama 15 menit. Saat melepas dari autoclave, fixola harus ditempatkan di kamar mandi dari maría hingga 50 ° C untuk mendingin. Tuang 25 hingga 30 mL ke dalam pelat berdiameter sterri 10 cm sterri.

Pelat harus dibiarkan dengan ketebalan rata-rata 4 mm (ideal), kisaran 3-5 mm diizinkan.

Jika Anda ingin menyiapkan darah menggunakan Müeller Hinton, darah domba steril 5% dituangkan sebagai alas.

Dapat melayani Anda: gliseraldehida 3-fosfat (g3p): struktur, fungsi

PH akhir medium harus antara 7,2 hingga 7,4.

Investasikan dan simpan di lemari es, sampai digunakan. Biarkan pelat mengambil suhu sekitar sebelum menggunakan.

Warna media yang disiapkan adalah krem ​​ringan.

Aplikasi

Ini digunakan untuk melakukan antibiogram atau tes kerentanan terhadap antibiotik untuk patogen pertumbuhan paling cepat.

Jika agar dilengkapi dengan darah berfungsi untuk melakukan antibiogram yang menuntut mikroorganisme seperti: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus SP, Neisseria Meningitidis, diantara yang lain. Itu juga telah digunakan untuk mengisolasi Legionel pneumophila.

Teknik antibiogram

Sebelum melakukan antibiogram, larutan bakteri yang setara dengan 1,5 x 10 harus disiapkan⁸ Sel.

Untuk melakukan ini, 3 hingga 4 koloni tanaman murni diambil dan ditangguhkan dalam kaldu kedelai triptych atau dalam kaldu Müeller Hinton, diinkubasi selama 2 hingga 6 jam dan konsentrasi dengan larutan salin steril disesuaikan, membandingkannya dengan pola Mac Farland Mac Farland 0,5%.

Jika mereka menuntut mikroorganisme, koloni dapat ditangguhkan secara langsung sampai 0,5% konsentrasi Mac Farland. Selanjutnya, pelat Müeller Hinton ditaburkan dengan swab yang diresapi dengan larutan bakteri yang disiapkan.

Untuk melakukan ini, swab direndam dalam larutan dan kemudian kelebihan cairan dihilangkan dengan tekanan terhadap dinding tabung. Segera setelah swab melewati seluruh permukaan, tanpa pergi tanpa menyentuh, kemudian pelat sedikit berubah dan menabur lagi. Operasi diulangi 2 kali lebih.

Diamkan selama 10 menit dan kemudian letakkan cakram antibiotik dengan penjepit steril, meninggalkan ruang 24 mm di antara satu dan yang lainnya. Setelah menempatkan setiap album di agar, tekan masing -masing dengan klem untuk memastikan bahwa mereka terpasang dengan baik.

Setelah proses, pelat diinvestasikan dan 35-37 ° C diinkubasi dalam aerobiosis selama 16 hingga 18 jam. Jika itu adalah mikroorganisme yang menuntut, itu dapat pantas mikroaerofilia dan jika antibiogram mengandung cakram oksasilin, itu harus dibaca pada 24 jam.

Untuk mengukur diameter setiap halo aturan digunakan. Hasilnya harus dicatat dalam mm. Selanjutnya, nilai yang diperoleh dengan tabel titik potong yang diterbitkan oleh manual CLSI saat ini berkorelasi.

Melaporkan sebagai sensitif, menengah (i), atau resisten (r), seperti halnya kasusnya.

Antibiotik dipilih sesuai dengan mikroorganisme yang terisolasi dan jenis infeksi yang menghasilkan.

Dapat melayani Anda: tingkat organisasi makhluk hidup

Terkadang penempatan strategis antibiotik harus diingat untuk menunjukkan pola resistensi fenotipik.

Penempatan Disk Strategis di Müeller Hinton Agar

Untuk enterobacteria, disk asam klavulanat harus ditempatkan di depan sefalosporin generasi ke -3 dan ke -4. Pelebaran berbentuk telur menunjukkan bahwa regangan adalah produsen spektrum beta -laktamase (BLE) yang diperluas. Ini berarti bahwa pasien tidak boleh diobati dengan sefalosporin apa pun.

Dalam staphylococcus itu penting.

Sebuah halo yang resisten pada eritromisin dan ketetapan pada halo klindamisin menunjukkan bahwa regangan memiliki resistensi yang dapat diinduksi terhadap klindamisin, strain (RIC). Ini berarti bahwa pengobatan klindamisin tidak akan efektif.

Untuk pencarian strain amp C yang diinduksi pada enterobacteria dan beberapa basil gram negatif yang tidak memusatkan, ceftazidime, cefoxitin atau piperacilin disc.

Sebuah halo kecokelatan pada salah satu cakram yang menghadap imipenem menunjukkan adanya amp yang diinduksi.

Untuk pencarian amp konstitutif, selokan 500 μg dengan cakram cloxacillin. Lebar sembuh di salah satu sefalosporin menunjukkan kepositifan.

Anda juga dapat mengganti cakram cloxacillin dengan 9 mm dari Whatman Filter Paper No. 6 diresapi dengan asam borat (400 μg) dengan jarak 18 mm. Itu ditafsirkan sama dengan yang sebelumnya.

Akhirnya, untuk menyelidiki produksi metalobethalactamases terutama di Pseudomonas aeruginosa, Sebuah disk yang diresapi dengan 10 μl asam etilendiaminternaacetic (EDTA 750 μg) dan asam tioglikolat (SMA 300 μg) digunakan, yang menghadap disk imipenem dan meropenem, pada jarak 15 mm.

Tes ini positif jika ada pelebaran lingkaran imipenem atau meropenem menuju album EDTA/SMA. Hasil ini harus dikonfirmasi oleh tes hodge yang dimodifikasi.

Metode ini terdiri dalam menginokulasi strain Escherichia coli ATCC 25922 di Müeller Hinton Plate. Disk imipenem di tengah pelat ditempatkan dan kemudian stro disk dibuat ke pinggiran dengan strain P. Aeruginosa mencurigakan. Anda dapat mencoba hingga 4 strain per piring.

Tes akan positif jika ada zona distorsi halo imipenem di sekitar stro.

Itu dapat melayani Anda: neolamarckismo: latar belakang dan karakteristik

Penyebab hasil yang salah

-Disk antibiotik yang tidak diawetkan dapat menghasilkan resistensi palsu. Misalnya, cakram oxacillin sangat rentan terhadap perubahan suhu.

-PH media di bawah yang ditunjukkan (asam) menghasilkan lingkaran cahaya yang lebih kecil dalam aminoglikosida dan makrolida (risiko resistensi palsu), dan lingkaran cahaya yang lebih besar pada penisilin, tetrasiklin dan novobiocin (risiko sensitivitas palsu).

-Jika pH berada di atas yang ditunjukkan (alkali), efek yang dijelaskan di atas diinvestasikan.

-Media dengan konsentrasi timin dan timidin tinggi mempengaruhi hal -hal penghambatan sulfonamide dan trimetoprim secara signifikan.

-Konsentrasi kalsium dan magnesium yang tinggi menghasilkan resistensi palsu aminoglikosida, polymixin B dan tetrasiklin di depan strain Pseudomonas aeruginosa.

-Konsentrasi rendah kalsium dan magnesium menghasilkan kepekaan palsu aminoglikosida, polyxin B dan tetrasiklin di depan strain Pseudomonas aeruginosa.

-Kehadiran seng mempengaruhi hasil cakram karbapenem (imipenem, meropenem dan ertapenem).

-Ketebalan media di bawah 3 mm menghasilkan hasil sensitivitas palsu, sedangkan ketebalan di atas 5 akan menghasilkan resistensi palsu.

-Mobilisasi cakram dalam antibiogram akan memberikan lingkaran cahaya yang cacat, karena pelepasan antibiotik langsung.

- Inokuler yang sangat lemah mempengaruhi hasil, karena tidak akan ada pertumbuhan yang seragam atau konvergen dalam agar, kondisi yang diperlukan untuk mengukur halo penghambatan, selain halo dapat memberikan yang lebih besar dari biasanya.

-Inokulos terlalu dimuat dapat memberikan hal yang lebih kecil dari normal.

-Jangan hormati jarak antara cakram membuat satu halo tumpang tindih dengan yang lain dan tidak dapat dibaca dengan benar.

-Inkubasi dengan co₂ Meningkatkan lingkaran lingkaran tetrasiklin dan cakram meticillin.

-Inkubasi pada suhu di bawah 35 ° C menghasilkan lingkaran cahaya yang lebih besar.

-Agregat darah mengurangi ukuran halo sulfamide.

Keterbatasan

Sensitivitas antibiotik yang ditunjukkan dalam antibiogram terhadap mikroorganisme (In vitro) Ini bukan jaminan bahwa itu akan berhasil In vivo.

Qa

Untuk mengetahui apakah media tersebut mengandung jumlah timina yang tepat, ketegangan harus ditaburkan dari Enterococcus faecalis ATCC 29212 dan membuktikan kerentanan terhadap trimetoprim sulfametoxazole (SXT), itu harus memberikan halo yang sama atau> 20 mm untuk memuaskan.

Referensi

1. Cona e. Kondisi untuk studi kerentanan yang baik dengan menggunakan tes diseminasi. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
2. Laboratorium Britania. Müeller Hinton Agar. Tersedia di: Britanialab.com