Biuret Foundation, Reagents, Prosedur, Penggunaan

Dia Biuret Ini adalah reagen yang digunakan untuk penentuan rantai panjang dan protein rantai pendek. Ini terutama digunakan di bidang kimia analitik dan analisis uroan untuk menyelidiki konsentrasi total serum, plasma dan protein urin.

Nilai protein dapat ditingkatkan atau dikurangi dalam patologi tertentu. Gambar hipoproteinemia biasanya disajikan pada pasien dengan penyakit ginjal, pada kekurangan gizi dan pada pasien dengan infeksi kronis.

Struktur kimia kompleks yang terbentuk dalam reaksi biuret uji biuret positif. Sumber: yikrazuul [domain publik]/flickr

Sementara hiperproteinemia diamati pada patologi seperti multiple myeloma, sistemik lupus erythematosus, endokarditis bakteri, meningitis bakteri, makroglobulinemia Waldenstrom, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara lain, antara.

Di sisi lain, keberadaan protein dalam urin disebabkan oleh penyaringan albumin oleh ginjal. Ini adalah perilaku patologis yang harus dipelajari.

Dalam hal ini, biuret sangat berguna, karena memungkinkan mengukur keberadaan protein serum, plasma, urin, di antara banyak sampel lainnya.

Bahkan biuret dapat digunakan untuk menyelidiki keberadaan dan konsentrasi protein dalam sampel komposisi yang tidak diketahui atau tidak diketahui. Oleh karena itu, ini banyak digunakan di bidang penelitian.

Tes Biuret didasarkan pada pendeteksian tautan peptida. Tes diberikan dalam medium alkali. Sampel harus berisi setidaknya dua tautan peptida sehingga kompleks warna kekuatan violet dapat dibentuk. Kompleks ini dibentuk oleh penyatuan tautan dan ion tembaga.

[TOC]

Dasar

Reagen Biuret terdiri dari kalium hidroksida, cupric sulfat dan natrium dan kalium tartrato. Sodium hidroksida digunakan untuk alkalisasi lingkungan, karena kondisi ini sangat diperlukan untuk terjadi reaksi.

Zat yang bereaksi dengan protein adalah cupric sulfate, sedangkan natrium tartrato memiliki fungsi tidak memungkinkan pembentukan tembaga hidroksida, yang cenderung mengendap dan mengganggu reaksi.

Dapat melayani Anda: fermentasi: riwayat, proses, jenis, contoh

Jika dalam sampel ada zat yang memiliki ikatan peptida (polipeptida atau protein) tes akan memberikan positif.

Reaksi ditafsirkan sebagai positif ketika solusinya menjadi violet. Warna dihasilkan oleh pembentukan kompleks antara setidaknya dua ikatan peptida yang memiliki kelompok co-NH dan kation cupric saat ini.

Kompleks violet dapat dibentuk dengan dua cara: satu adalah karena hilangnya proton dari kelompok di tengah yang berikatan dengan logam (kasar), dan yang lainnya oleh penyatuan oksigen dan elektron nitrogen yang bebas dan mengikat dengan tembaga.

Reaksi ini dapat bervariasi dalam intensitas dan warna tergantung pada jenis protein.

Tes dapat dilakukan secara kualitatif atau kuantitatif. Dalam bentuk kualitatif dilaporkan positif atau negatif. Sedangkan dalam bentuk kuantitatif konsentrasi dapat diukur dengan metode spektrofotometri.

Reaksi dibaca antara 540-560 nm. Intensitas warna berbanding lurus dengan konsentrasi tautan peptida dalam sampel.

Reagen

-Sodium hidroksida (NaOH) pada 20%

-1% pentahydrate cupric sulfat (Cuo₄. 5H₂SALAH SATU)

-Campuran natrium dan kalium tetrahidrat tartrato (KNAC₄H₄SALAH SATU₆· 4h₂SALAH SATU)

Stabilitas Reagen Biuret

-Itu harus disimpan dalam pendinginan.

Prosedur

Teknik

-Tempatkan 100 μl sampel atau pola yang akan dianalisis dalam tabung reaksi.

-Tambahkan 2 ml natrium hidroksida.

-Aduk sangat baik.

-Tambahkan 5 ml reagen biuret.

-Campur dan tinggalkan 25 menit pada suhu kamar, tutup dan lindungi dari cahaya.

-Amati pembentukan atau tidak dari warna dan ukur spectofotometrically.

Kurva kalibrasi

Untuk melakukan kurva kalibrasi, Anda dapat menggunakan albumin sapi serum sebagai sebuah pola. Beberapa konsentrasi disiapkan darinya. Misalnya 25, 50, 75, 100, 125 dan 150%.

Reaksi dipasang dengan semua konsentrasi yang diketahui ini dan absorbansi dibacakan dengan panjang gelombang 540 nm. Dengan data konsentrasi yang diketahui dan pembacaan yang menyerap, kurva kalibrasi dilakukan.

Itu dapat melayani Anda: flora dan fauna Cina: spesies representatif

Dalam setiap penentuan atau banyak sampel olahan itu disarankan. Sebagai pola kalibrasi, Anda dapat menggunakan albumin sapi serum 0,1-2 mg/ml.

Pengukuran dilakukan dalam spektrofotometer 540 nm.

Linearitas dipenuhi hingga konsentrasi 12 g/dL.

Gangguan

Zat yang mengganggu dalam tes biuret

Meskipun tidak terlalu sering, perlu dicatat bahwa selama pelaksanaan tes ini beberapa zat dapat mengganggu. Misalnya, keberadaan amonium dapat menghambat pembentukan warna.

Demikian juga, zat lain dapat menyerap panjang gelombang yang sama, seperti pigmen tertentu.

Di sisi lain, gangguan dapat dihasilkan ketika zat lain selain dari tautan peptida membentuk kompleks dengan garam logam. Contoh: Beberapa karbohidrat dan lipid tertentu.

Dalam hal menunjukkannya untuk menganalisis beberapa jenis endapan, itu harus disaring atau disentrifugasi sebelum menyiapkan tes.

Zat yang tidak mengganggu dalam tes biuret

Tes tidak terpengaruh oleh keberadaan:

-Bilirubin hingga konsentrasi 20 mg/dL.

-Hemoglobin ke konsentrasi 750 mg/dL.

-Dekstran ke konsentrasi 30 g/l.

-Trigliserida hingga konsentrasi 4000 mg/dL.

Keuntungan

-Ini adalah metode eksekusi yang sederhana.

-Ini adalah tes ekonomi.

-Itu memiliki spesifisitas protein tinggi.

-Sedikit gangguan.

Kerugian

Ini memiliki sedikit sensitivitas untuk mendeteksi protein dalam jumlah rendah. Pekerjaan yang dilakukan oleh Fuentes dan kolaborator menegaskan bahwa metode uji biuret memiliki batas deteksi protein 1 mg/mL dan batas kuantifikasi 3 mg/ml.

Namun, penelitian lain yang dilakukan di University of Amazon melaporkan nilai yang jauh lebih rendah. Batas deteksi yang dilaporkan penelitian adalah 0,020 mg/ml dan batas kuantifikasi 1.33 mg/ml.

Aplikasi

Reagen atau tes biuret digunakan untuk penentuan protein dalam sampel klinis dan non -klinis dalam laboratorium rutin dan penelitian.

Dapat melayani Anda: karakteristik makhluk hidup

Patologi yang mempelajari atau menurun Protein

Dalam banyak patologi, penting untuk menentukan konsentrasi total protein dalam sampel klinis, mampu menjadi tinggi atau menurun.

Mereka ditinggikan di:

-Mieloma multipel,

-Lupus erythematosus sistemik,

-Endokarditis bakteri,

-Bakteri meningitis,

Waldestrom Macroglobulinemia, antara lain.

Itu berkurang di:

-Insufisiensi ginjal,

-Orang dengan kekurangan gizi parah,

-Pasien dengan infeksi kronis, antara lain.

Sampel klinis

Sampel klinis yang paling umum adalah serum, plasma dan urin. Nilai normal protein serum atau plasma adalah 6.0-8.8 gr/dl.

Konsentrasi protein pada orang dewasa pada orang dewasa tidak melebihi angka 150 mg/24 jam.

Nilai normal indeks protein urin/kreatinin dalam urin

Bayi: < a 0,50 mg

Anak -anak 2 tahun ke atas: Indeks: 0,20 mg

Orang dewasa: < 0,2 mg

Sampel non -klinis

Reaksi biuret dapat digunakan untuk banyak jenis sampel non -klinis, seperti produk susu, serum antiofid atau zat yang tidak diketahui yang mana keberadaan protein ingin menyelidiki.

Referensi

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez dan. (2014). Karakterisasi Fisik-Kimia dan Kandungan Protein Ekstrak Cairan Mangrove Oame (Crassostrearizophorae). Jurnal Kimia Kuba, 26 (1), 66-74. Diperoleh pada 26 Juni 2019, dari http: // scielo.Sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Karakterisasi fungsional almond biji mangga (Mangifera menunjukkan l.) Majalah Sains Pembangunan. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 19 Jun 2019, 16:37 UTC. 26 Jun 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. Standardisasi metode biuret untuk mengukur protein total dalam serum antibotropik multi -pos yang diproduksi di National Biological Products Center. Bol - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  Tersedia di: Repositori.INS.Pelayar.pe
5. Laboratorium Winer. Total protein. Metode kolorimetri untuk menentukan protein serum dan plasma total. Tersedia di: wiener-lab.com.ar