Kaldu malonate, persiapan dan penggunaan

Dia Kaldu Malonato Ini adalah media kultur cair yang digunakan untuk tes diagnostik (tes Malonato), yang digunakan untuk membedakan beberapa genre dari keluarga enterobakteriace. Itu dibuat oleh Leifson dalam 1.933 dan kemudian dimodifikasi oleh Ewing, yang menambahkan sedikit ekstrak dekstrosa dan ragi ke formula asli.

Media saat ini terdiri dari ekstrak ragi, amonium sulfat, dipotassium fosfat, monopotonik fosfat, natrium klorida, natrium malonat, dekstrosa dan biru bromotitimol. Tes ini umumnya termasuk dalam baterai identifikasi biokimia untuk enterobacteria, membantu membedakan genera dan spesies tertentu.

Representasi grafis dari tes Malonato. KE. Tes negatif, b. Tes negatif (pengasaman), c. (Alkalinisasi Tengah) Tes Positif. Sumber: tabung berwarna domain -domaina.bersih

Tes Malonato terutama didasarkan pada kemampuan beberapa mikroorganisme untuk menggunakan natrium malonato sebagai sumber karbon tunggal dan sebagai sumber nitrogen untuk amonium sulfat.

Tes Malonato biasanya memberikan positif pada beberapa spesies genre Enterobacter, Klebsiella dan Citrobacter. Sementara, sebagian besar spesies genre Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus dan Providencia, berikan reaksi negatif.

[TOC]

Dasar

Tes malonate terdiri dari bukti.

Sebagian besar enterobacteria yang tidak menggunakan Malonato mampu tumbuh di media ini, mengambil nutrisi sebagai ekstrak dekstrosa dan ragi.

Dalam hal ini, setiap upaya alkalisasi karena penggunaan Peptones akan ditimbulkan oleh produksi asam yang dihasilkan oleh fermentasi dekstrosa. Demikian juga, fosfat dipotassium dan monopotasik bertindak sebagai buffer menjaga pH pada 6,7.

Itu bisa melayani Anda: di sekitar Donax

Itulah sebabnya, ketika tes negatif, kaldu adalah warna asli yang sama (hijau). Jarang medium dapat diasamkan karena fermentasi dekstrosa; Tanpa menggunakan peptonas dan indikator pH akan mengubah warna dari medium menjadi kuning. Untuk ini, pH harus turun ke 6.

Sekarang, ketika tes ini positif bahwa mikroorganisme menggunakan malonato dan amonium sulfat masing -masing sebagai sumber karbon dan nitrogen, tanpa menggunakan komponen lainnya.

Dalam hal ini media dialkalisasi karena pembebasan natrium dan akibatnya pembentukan NaOH. Dalam pengertian ini, indikator pH (bromotimol blue) mengubah warna tengah hijau menjadi biru ketika pH sama dengan atau lebih besar dari 7,6. Biru bisa jernih atau intens (Prusia biru).

Akhirnya, natrium klorida mempertahankan osmolaritas medium dan air adalah dilue dari semua komponen.

Penafsiran

Kaldu dengan warna yang sama (hijau): tes negatif

Kaldu Kuning: Tes Negatif

Kaldu biru jernih atau intens: tes positif

Ada varian yang disebut Malonatato Phenylalanine Broth, juga disebut Shaw dan Clarke Medium. Dalam hal ini, dua tes dapat dianalisis, penggunaan Malonato sebagai sumber karbon dan produksi asam piruvat dari fenilalanin.

Persiapan

Kaldu Malonato

Jumlah gram yang ditentukan oleh sisipan rumah komersial yang dipilih menimbang (dapat bervariasi dari satu ke yang lain). Gram berat ditangguhkan dalam satu liter air suling. Panaskan sedikit sampai pembubaran total. Distribusikan 3 mL medium dalam tabung reaksi 13/100 dengan tutup kapas.

Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 atau 20 menit.

Dingin. Jika tidak akan segera digunakan, simpan di lemari es sampai digunakan. Temui kaldu pada suhu kamar sebelum menginokulasi mereka.

Dapat melayani Anda: Giptodon

PH medium harus 6,7 ± 0,2. Warna media yang disiapkan berwarna hijau botol.

Kaldu fenilalanin malonato

Beratnya 11 gr dari media dehidrasi dan larut dalam 1 liter air suling. Sisa persiapan sama dengan yang dijelaskan di atas.

Ini juga dapat disiapkan dengan menambahkan 2 gr/L fenilalanin ke media kaldu Malonato sebelum disterilkan.

Menggunakan

Ini digunakan sebagai bagian dari baterai uji biokimia yang dipasang untuk identifikasi bakteri keluarga Enterobacteriaceae.

Membantu membedakan antara:

-Genus Klebsiella dan Enterobacter (+) dari genus Escherichia dan Serratia (-).

-Spesies Ssp arizonae entrico salsonella ssp, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella enterica ssp diarizonae (+), spesies Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Dari genus Klebsiella umumnya (+) dari genus actinobacillus (-).

-Kadang -kadang dapat membantu diferensiasi genre dan spesies bakteri yang bukan milik keluarga Enterobacteriaceae, seperti di antara basil gram negatif yang tidak memusatkan Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.

Prosedur

Di bawah korek api, sebagian koloni murni diambil, menggunakan pegangan platinum yang disterilkan dengan benar dan didinginkan. Sampel yang diambil (inokulum ringan) larut dalam kaldu Malonato. Diinkubasi dengan tutup malas dalam aerobiosis pada suhu 35 ° C ± 0,2 selama 24 hingga 48 jam.

Anda juga dapat menginokulasi kaldu Malonato dari tanaman 18 - 24 jam dalam triptyse soy broth. Dalam hal ini, 0,01 mL diambil dengan pipet steril dan kaldu Malonato diinokulasi. Diinkubasi dengan tutup malas dalam aerobiosis pada suhu 35 ° C ± 0,2 selama 24 hingga 48 jam.

Dapat melayani Anda: konsumen sekunder

Menyelesaikan waktu hasilnya ditafsirkan. Sisa -sisa warna biru selesai 48 jam inkubasi harus dianggap positif. Tes tidak boleh ditafsirkan sebagai negatif sampai waktu inkubasi 48 jam telah terpenuhi.

Dalam kasus menggunakan varian kaldu fenilalanin Malonato, Malonato pertama kali ditafsirkan dan kemudian 5 tetes HCl 1N dan 3-5 tetes ferrik 8% ditambahkan. Warna hijau gelap ditafsirkan sebagai tes positif untuk fenilalanin. Jika sebaliknya media menjadi biru pucat, tes negatif untuk fenilalanin.

Qa

Untuk melakukan kontrol sterilitas media, satu atau dua kaldu harus diinkubasi pada suhu 35 ° C ± 0,2 selama 24 jam inkubasi. Setelah waktu ini seharusnya tidak ada kekeruhan atau perubahan warna.

Untuk kontrol kualitas, Anda dapat menggunakan strain yang dikenal atau bersertifikat, seperti: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Ssp arizonae entrico salsonella ssp ATCC 13314 dan Escherichia coli ATCC 25922.

Hasil yang diharapkan adalah:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae Dan Ssp arizonae entrico salsonella ssp Mereka memberikan reaksi positif (setengah biru).
• Untuk Escherichia coli Hasilnya harus memberikan negatif, yaitu, diharapkan tidak ada perubahan warna (hijau) atau akan berubah kuning karena fermentasi glukosa.

Batasan

Jangan gunakan kaldu yang menunjukkan kekeruhan, endapan, perubahan warna atau tanda -tanda kerusakan.

Referensi

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Insulasi mikrobiologis Salmonella spp. dan alat molekuler untuk dideteksi. Kesehatan Uninorte. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. Tersedia di: Scielo.org.bersama
2. Bbl. Kaldu malonate, ewing dimodifikasi. 2007. Tersedia di: BD.com
3. Laboratorium Senna. Kaldu Malonato. Tersedia di: Ilmiah.com
4. Renilab. Kaldu Malonato. 2013. Tersedia di: ini.Renilab.ind.Br
5. Diagnostik mbiologi. Kaldu Malonato. Tersedia di: Mbiologi.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.
7. Laboratorium Conda Pronadisa. Kaldu fenilalanin malonato. Tersedia di: Condalab.com