Foundation, HPLC) Foundation, HPLC) High Efficacy Liquid Chromatography (HPLC)

Itu Kromatografi cair efisiensi tinggi Ini adalah teknik instrumental yang digunakan dalam analisis kimia yang diizinkan untuk memisahkan campuran, memurnikan dan mengukur komponennya, serta melakukan penelitian lain. Ini dikenal dengan singkatan HPLC, berasal dari bahasa Inggris: Kromatografi cair berkinerja tinggi.

Dengan demikian, seperti namanya, ia bekerja dengan memanipulasi cairan. Ini terdiri dari campuran yang terdiri dari analit atau sampel yang menarik, dan satu atau lebih pelarut yang bertindak sebagai fase gerak; yaitu, salah satu yang menyeret analit di seluruh tim HPLC dan kolom.

Peralatan HPLC. Sumber: dqwyy [cc by-sa 4.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/4.0)]

HPLC secara luas disebarluaskan oleh laboratorium analisis kualitas di banyak perusahaan; seperti apoteker dan makanan. Analis yang dimaksud harus menyiapkan sampel, fase gerak, memeriksa suhu dan parameter lainnya, dan menempatkan jalan di dalam roda atau korsel sehingga peralatan melakukan suntikan secara otomatis.

Peralatan HPLC digabungkan ke komputer yang dengannya kromatogram yang dihasilkan dapat diamati, serta memulai analisis, mengontrol aliran fase gerak, memprogram jenis elusi (isokratis atau gradien), dan nyalakan detektor (UV -Vis atau spektrofotometer massa).

[TOC]

Dasar

Tidak seperti kromatografi cair konvensional, seperti kertas atau kolom yang diisi dengan gel silika, HPLC tidak bergantung pada gravitasi sehingga cairan membasmi fase stasioner. Sebaliknya, bekerja dengan pompa pers tinggi, yang mengairi fase seluler atau eluen melalui kolom dengan intensitas yang lebih besar.

Dengan cara ini, itu tidak perlu.

Dapat melayani Anda: karbonoid: elemen, karakteristik dan penggunaan

Tetapi efisiensi teknik ini bukan karena detail ini, tetapi juga oleh partikel pengisian kecil yang membentuk fase stasioner. Menjadi lebih kecil, area kontaknya dengan fase gerak lebih besar, sehingga akan berinteraksi ke tingkat yang lebih baik dengan analit dan molekulnya akan dipisahkan lebih banyak.

Dua karakteristik ini, ditambah fakta bahwa teknik ini memungkinkan penggabungan detektor, membuat HPLC jauh lebih tinggi daripada kromatografi lapisan halus atau kertas. Pemisahan lebih efisien, fase gerak bergerak lebih baik melalui fase stasioner, dan kromatogram memungkinkan untuk mendeteksi beberapa analisis dalam analisis.

Peralatan

Diagram yang disederhanakan dari pengoperasian peralatan HPLC. Sumber: Gabriel Bolívar.

Diagram yang disederhanakan ditunjukkan di atas cara kerja tim HPLC. Pelarut ditemukan dalam wadah masing -masing, disusun dengan selang agar pompa membawa volume kecil dari mereka ke dalam peralatan; Kami memiliki fase gerak.

Fase seluler atau eluen harus dipakai terlebih dahulu, sehingga gelembung tidak mempengaruhi pemisahan molekul analit, yang dicampur dengan fase gerak begitu peralatan membuat suntikan.

Kolom kromatografi terletak di dalam oven yang memungkinkan mengatur suhu. Dengan demikian, untuk sampel yang berbeda ada suhu yang memadai untuk mencapai pemisahan kinerja tinggi, serta katalog luas kolom dan jenis pengisian atau fase stasioner untuk analisis spesifik dalam analisis spesifik.

Fase gerak dengan analit terlarut memasuki kolom, dan darinya pertama -tama menghilangkan molekul yang "merasakan" afinitas yang lebih sedikit untuk fase stasioner, sementara kemudian eluuate yang paling dipertahankan olehnya. Setiap molekul Eluida menghasilkan sinyal yang divisualisasikan dalam kromatogram, di mana waktu retensi dari molekul terpisah diamati.

Dapat melayani Anda: pencairan: konsep, gas, tanah dan seismik, seminal

Dan di sisi lain, fase gerak setelah melewati detektor berakhir dengan wadah limbah.

Jenis HPLC

Ada banyak jenis HPLC, tetapi di antara semuanya yang paling menonjol adalah empat berikut.

Kromatografi fase normal

Kromatografi fase normal mengacu pada di mana fase stasioner adalah sifat polar, sedangkan Apolar Mobile. Meskipun disebut normal, sebenarnya itu adalah yang paling tidak digunakan, menjadi fase terbalik yang paling luas dan efisien.

Kromatografi fase terbalik

Menjadi fase terbalik, sekarang fase stasioner adalah apolar dan fase gerak kutub. Ini sangat berguna dalam analisis biokimia, karena banyak biomolekul larut lebih baik dalam pelarut air dan kutub.

Kromatografi pertukaran ion

Dalam jenis kromatografi ini, analit, dengan beban positif atau negatif, bergerak melalui kolom yang menggantikan ion yang ditempatkannya. Semakin besar beban, semakin besar retensi, sehingga banyak digunakan untuk memisahkan logam transisi ion.

Kromatografi eksklusi molekuler

Kromatografi ini, bukannya berpisah, bertanggung jawab untuk memurnikan campuran yang dihasilkan. Seperti namanya, analit dipisahkan tidak lagi tergantung pada seberapa terkait dengan fase stasioner, tetapi sesuai dengan ukuran molekul dan massanya.

Molekul terkecil akan lebih dipertahankan daripada molekul besar, karena yang terakhir tidak terperangkap di antara pori -pori tambalan polimer dari kolom.

Aplikasi

HPLC memungkinkan analisis kualitatif dan kuantitatif. Berkenaan dengan kualitatif, ketika membandingkan waktu retensi kromatogram dalam kondisi tertentu, keberadaan senyawa tertentu dapat dideteksi. Kehadiran ini dapat menjadi indikasi suatu penyakit, pemalsuan, atau penggunaan narkoba.

Dapat melayani Anda: terlarut dan pelarut

Oleh karena itu, itu adalah tim adalah bagian dari laboratorium diagnostik. Demikian juga, ia berada di dalam industri farmasi, karena memungkinkan untuk memverifikasi kemurnian produk, serta kualitas yang sama mengenai pembubarannya di lingkungan lambung. Bahan awal juga menyerahkan ke HPLC untuk memurnikannya dan menjamin kinerja yang lebih baik dalam sintesis obat.

HPLC memungkinkan Anda untuk menganalisis dan memisahkan campuran protein kompleks, asam amino, karbohidrat, lipid, porfirin, terpenoid, dan pada dasarnya ini adalah pilihan yang sangat baik untuk bekerja dengan ekstrak tanaman.

Dan akhirnya, kromatografi eksklusi molekuler memungkinkan Anda memilih polimer dengan ukuran yang berbeda, karena beberapa mungkin lebih kecil atau besar. Dengan cara ini, produk dengan massa molekul rata -rata rendah atau tinggi diperoleh, ini menjadi faktor penentu dalam sifatnya dan aplikasi atau sintesis di masa depan.

Referensi

1. Hari, r., & Underwood, a. (1989). Kimia analitik kuantitatif. (Edisi kelima.). Pearson Prentice Hall.
2. Bussi Juan. (2007). Kromatografi cair kemanjuran tinggi. [PDF]. Pulih dari: jari.Edu.Oh
3. Wikipedia. (2019). Kromatografi cair kinerja tinggi. Diperoleh dari: di.Wikipedia.org
4. Clark Jim. (2007). Kromatografi cair berkinerja tinggi. Pulih dari: chemguide.bersama.Inggris
5. Matthew Barkovich. (5 Desember 2019). Kromatografi cair berkinerja tinggi. Libretteks Kimia. Pulih dari: chem.Librettexts.org
6. G.P. Thomas. (15 April 2013). High Performance Liquid Chromatography (HPLC) - Metode, Manfaat dan Aplikasi. Pulih dari: azom.com