Setengah dari fondasi, persiapan, penggunaan dan keterbatasan

Dia Setengah dari atau fermentasi glukosa adalah agar semi-padat yang dirancang khusus untuk studi metabolisme karbohidrat oksidatif dan fermentasi dalam kelompok penting mikroorganisme yang berbeda dari enterobakteri, yang disebut basil negatif non-enteréric negatif.

Itu diciptakan oleh Hugh dan Leifson; Para peneliti ini menyadari bahwa media konvensional untuk studi produksi asam dari karbohidrat tidak cocok untuk kelompok bakteri spesifik ini.

KE. Tengah komersial basal. B. Tabung dengan setengah ditabur. Sumber: Foto A dan B yang diambil oleh penulis MSC. Marielsa Gil.

Ini karena basil negatif non -enteric biasanya menghasilkan asam dalam jumlah rendah, tidak seperti Enterobacteria.

Dalam pengertian ini, media memiliki karakteristik khusus yang dapat mendeteksi sejumlah kecil asam yang terbentuk, baik dengan oksidatif maupun fermentasi. Perbedaan ini terkait dengan jumlah pepton, karbohidrat dan agar.

Media ini mengandung lebih sedikit peptonas dan konsentrasi karbohidrat yang lebih besar, dengan cara ini produk -produk yang menggerogoti media dikurangi sebagai akibat dari metabolisme protein dan produksi asam meningkat dengan penggunaan karbohidrat.

Di sisi lain, penurunan jumlah agar mendukung penyebaran asam yang dihasilkan oleh seluruh media, selain mengamati motilitas.

Media terdiri dari pepton, natrium klorida, biru bromotitimol, dipotassium fosfat, agar dan karbohidrat. Karbohidrat yang paling umum adalah glukosa tetapi yang lain dapat digunakan sesuai dengan yang ingin Anda pelajari, seperti laktosa, maltosa, xylose, antara lain.

[TOC]

Dasar

Seperti cara budaya apa pun, lingkungan harus mengandung zat gizi yang menjamin pertumbuhan bakteri; Zat -zat ini adalah Peptones.

Untuk bagiannya, karbohidrat menyediakan energi dan pada saat yang sama berfungsi untuk mempelajari perilaku mikroorganisme terhadapnya, yaitu, memungkinkan untuk mengklasifikasikan bakteri sebagai organisme oksidatif, fermentasi, atau non -sakral.

Media berisi rasio pepton/karbohidrat 1: 5 tidak seperti media konvensional 2: 1. Ini menjamin bahwa jumlah amina alkali yang terbentuk dari degradasi pepton tidak menetralkan pembentukan asam lemah.

Dapat melayani Anda: sphingomyeline: apa itu, struktur, fungsi, sintesis

Di sisi lain, media mengandung natrium klorida dan dipotassium fosfat. Senyawa -senyawa ini menstabilkan osmotik di tengah dan mengatur pH masing -masing. Bromootimol Blue adalah indikator pH, yang membuat warna hijau kuning dengan produksi asam.

Beberapa mikroorganisme dapat menggunakan karbohidrat dengan oksidatif atau dengan rute fermentasi, sementara yang lain tidak mengambil jalan baik.

Ini tergantung pada karakteristik setiap mikroorganisme. Sebagai contoh, beberapa mikroorganisme aerobik yang ketat dapat mengoksidasi karbohidrat tertentu, dan anaerob opsional dapat mengoksidasi dan memfermentasi tergantung pada lingkungan yang mengelilinginya, sementara yang lain tidak mengoksidasi atau memfermentasi karbohidrat (ascarolitik).

Akhirnya, ada modifikasi media yang direkomendasikan oleh CDC yang berisi basis khusus dengan fenol merah sebagai indikator.

Proses oksidasi

Proses oksidasi glukosa tidak memerlukan fosforilasi glukosa, seperti yang terjadi dalam proses fermentasi. Dalam hal ini gugus aldehida dioksidasi menjadi gugus karboksil, menghasilkan asam glukonat. Ini pada gilirannya dioksidasi menjadi 2-zo-glikonik.

Molekul asam piruvat terakhir atau dua menumpuk atau menurunkan. Sistem ini membutuhkan keberadaan oksigen atau senyawa anorganik sebagai akseptor elektron akhir.

Produksi asam dengan rute ini lebih lemah dari yang diperoleh dengan rute fermentasi.

Proses fermentasi

Untuk membuat fermentasi glukosa oleh salah satu jalan yang tersedia, pertama-tama harus difosforilasi, menjadi glukosa-6-fosfat.

Fermentasi glukosa dapat mengambil beberapa jalan, yang utama adalah jalur Embden-Meyerhof-Parna dari degradasi pentosa.

Jalur yang dipilih akan tergantung pada sistem enzimatik yang memiliki mikroorganisme.

Via De Embden-Meyerhof- PARNA

Dalam fermentasi glukosa oleh Embden-Meyerhof-Parna. Dari sana zat perantara berasal, yaitu asam piruvat.

Dapat melayani Anda: fotoperiod

Dari sana, berbagai jenis asam campuran akan terbentuk yang dapat bervariasi dari satu spesies ke spesies lainnya.

Sistem ini terjadi tanpa adanya oksigen dan membutuhkan senyawa organik sebagai akseptor elektron akhir.

Rute Encoudoroff

Dalam fermentasi glukosa oleh rute intner-doucoroff, glukosa 6-fosfat diberikan ke glukon-ᵼ-lactone-6-fosfat dan dari sana dioksidasi menjadi 6-fosfogluvat dan 2-Zo-3-Dedexi-6 fosfoglukonat, untuk akhirnya membentuk asam piruvat. Ini melalui kebutuhan oksigen sehingga ada glikolisis.

Rute untuk degradasi pentosa atau warburg-dikens monofosfat monofosfat melalui

Rute ini adalah hibrida dari 2 sebelumnya. Ini dimulai mirip dengan jalur Entner-Doudoroff, tetapi kemudian gliseraldehida-3-fosfat terbentuk sebagai prekursor asam piruvat, seperti halnya dalam jalur Embden-Meyhof-.

Persiapan

Menimbang:

2 gr pepton

5 gr natrium klorida

10 gr dari D-glucosa (atau karbohidrat yang akan disiapkan)

0,03 gr dari bromotitimol blue

3 gr dari agar

0,30 gr dari fosfat dipotasic

1 liter air suling.

Campur semua senyawa kecuali karbohidrat dan larut dalam 1 liter air suling. Panaskan dan aduk sampai larut secara keseluruhan.

Saat mendinginkan pada 50 ° C, 100 mL glukosa ditambahkan ke 10% (disaring).

Mendistribusikan secara aseptik 5 ml media tabung reaksi dengan tutup kapas dan autoklavasi pada 121 ° C, 15 pon tekanan selama 15 menit.

Biarkan posisi vertikal.

PH medium harus 7, 1. Warna media yang disiapkan berwarna hijau.

Simpan di lemari es.

Aplikasi

Media adalah cara khusus untuk menentukan perilaku metabolisme mikroorganisme terhadap karbohidrat. Terutama bagi mereka yang membentuk asam dengan cara yang langka, lemah atau nol.

Ditabur

Untuk setiap mikroorganisme, 2 tabung diperlukan, keduanya harus diinokulasi dengan mikroorganisme untuk dipelajari. Koloni diambil dengan pegangan lurus dan tusukan dibuat di tengah tabung tanpa mencapai bagian bawah; Anda dapat membuat beberapa tusukan, selama Anda tidak tertarik untuk mengamati motilitas.

Dapat melayani Anda: alanine: karakteristik, struktur, fungsi, biosintesis

Ke salah satu tabung ditambahkan satu lapisan vaseline cair steril atau parafin cair steril (sekitar 1 hingga 2 mL) dan diberi label dengan huruf "F". Tabung lainnya dibiarkan asli dan diberi label dengan huruf "O". Kedua tabung diinkubasi pada suhu 35 ° C dan diamati setiap hari hingga 3 hingga 4 hari.

Penafsiran

Metabolisme dan produksi gas

Tabel: Klasifikasi mikroorganisme sesuai dengan perilaku mereka di tabung terbuka (oksidatif) dan tertutup (fermentasi) (fermentasi)

Sumber: Dibuat oleh penulis MSC. Marielsa Gil

Gas diamati dengan pembentukan gelembung atau perpindahan agar.

Perlu dicatat bahwa organisme yang hanya mengoksidasi glukosa tetapi tidak difermentasi, tidak dapat memfermentasi karbohidrat lain, dalam hal apa pun itu hanya akan mengoksidasinya. Oleh karena itu, dalam situasi ini tabung yang disegel akan dihilangkan untuk studi karbohidrat lainnya.

Motilitas

Selain itu, di tengah motilitas dapat dilihat.

Motilitas positif: Pertumbuhan yang tidak terbatas pada zona inokulasi. Ada pertumbuhan menuju sisi tabung.

Motilitas negatif: Pertumbuhan hanya di inokulum awal.

Qa

Sebagai kontrol kualitas, Anda dapat menggunakan strain berikut: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa Dan Moraxella sp. Hasil yang diharapkan adalah:

1. coli: Fermentor glukosa (tabung kuning dan gas).
2. Aeruginosa: Oksidader glukosa (tabung terbuka kuning dan segel hijau atau biru).
3. Moraxella SP: Non -removal (tabung terbuka hijau atau biru, tabung penyegelan hijau).

Batasan

-Beberapa mikroorganisme tidak dapat tumbuh di lingkungan. Dalam kasus ini tes diulang tetapi pada medium 2% serum atau 0,1% dari ekstrak ragi.

-Reaksi oksidasi sering diamati dekat dengan permukaan dan sisa media bisa hijau, dengan cara yang sama dianggap positif.

Referensi

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri pentingnya klinis. Edisi ke -3. Editorial Pan -American. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratorium Francisco Soria Melguizo. 2009. Media glukosa. Tersedia di: http: // f-soria.adalah
5. Laboratorium Conda Pronadisa. Tengah glukosa. Tersedia di: Condalab.com
6. Laboratorium BD. 2007. Medium basal. Tersedia di: BD.com