Simmons Citrate Agar

Pseudomonas fluorescens di Simmons Citrate Agar. Sumber: Keraguan, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Apa itu Simmons Citrate Apar?

Dia Simmons Citrate Agar Ini adalah media padat yang digunakan sebagai uji biokimia identifikasi mikroorganisme, terutama basil gram -negatif. Media asli dibuat oleh Koser pada tahun 1923.

Media sitrat koser terdiri dari kaldu yang mengandung natrium fosfat, amonium fosfat, monopotonik fosfat, magnesium sulfat dan natrium sitrat.

Seperti dapat dilihat, satu -satunya sumber karbon dalam medium adalah sitrat, dan nitrogen adalah amonium fosfat, menghilangkan protein dan karbohidrat sebagai sumber elemen ini, biasanya ada di media lain.

Oleh karena itu, bakteri yang diinokulasi dalam medium itu hanya dapat bereproduksi jika mampu mengambil karbon sitrat. Tesnya positif jika ada kekeruhan di tengah. Namun, saya memiliki ketidaknyamanan bahwa kekeruhan tidak spesifik dapat terjadi.

Masalah ini diselesaikan oleh Simmons dengan menambahkan agar bromotitimol ke formula asli Koser. Meskipun prinsipnya sama, itu ditafsirkan secara berbeda.

Dasar

Beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk bertahan hidup dengan tidak adanya fermentasi atau produksi asam laktat, yang perlu mencapai energi melalui penggunaan substrat lain. Dalam tes ini satu -satunya sumber karbon yang ditawarkan adalah sitrat.

Bakteri yang mampu bertahan hidup dalam kondisi ini memetabolisme sitrat dengan cepat dengan rute alternatif ke yang tradisional, menggunakan siklus asam trikarboksilat, atau siklus fermentasi sitrat.

Katabolisme sitrat oleh bakteri mencakup mekanisme enzimatik tanpa intervensi koenzim ke. Enzim ini dikenal dengan nama citrica (sitrat oxalacetate-liasa) atau demolase sitrat. Reaksi membutuhkan adanya kation bivalen, yang dalam kasus itu dipasok oleh magnesium.

Dapat melayani Anda: jenis pernapasan dan karakteristiknya

Reaksi menghasilkan oksaloasetat dan piruvat, yang kemudian menimbulkan asam organik di tengah pH alkali yang dibentuk dengan penggunaan sumber nitrogen. Asam organik ini digunakan sebagai sumber karbon yang menghasilkan karbonat dan bikarbonat, selanjutnya alkali medium.

Mode ditabur

Media Simmons Citrate harus sedikit diinokulasi dalam ekor ikan menggunakan lurus atau jarum, dan diinkubasi selama 24 jam hingga 35-37 ° C. Memuncak waktu hasilnya diamati.

Yang ditabur dilakukan hanya di permukaan agar, tanpa tusukan.

Penafsiran

Jika media adalah warna asli (hijau) dan tidak ada pertumbuhan yang terlihat, tesnya negatif, tetapi jika medium berubah biru, menunjukkan adanya produk alkali, yang terdeteksi oleh indikator pH. Dalam hal ini, tesnya positif.

Ini terjadi karena jika bakteri menggunakan karbon sitrat, ia juga mampu mengambil nitrogen dari amonium fosfat yang menghilangkan amonia, membuat alkali medium.

Di sisi lain, jika pertumbuhan bakteri diamati di tengah, tetapi tidak ada perubahan warna, tes juga harus dianggap positif, karena jika ada pertumbuhan, itu berarti bahwa bakteri dapat menggunakan sitrat sebagai a Sumber karbon, meskipun tidak ada perubahan pH pada saat itu (kadang -kadang bisa diambil).

Jika ada keraguan dalam interpretasi warna akhir, itu dapat dibandingkan dengan tabung sitrat yang tidak terinformasi.

Persiapan

Beratnya 24,2 gr dari media dehidrasi untuk satu liter air. Campur dan tinggalkan sekitar 5 menit. Selesai melarutkan pemanasan medium selama 1 atau dua menit, sering melambai.

Dapat melayani Anda: berapa tingkat makromolekulnya?

Sajikan 4 mL dalam tabung uji dan autoclavar pada 121 ° C selama 15 menit. Saat meninggalkan autoclave, miring dengan bantuan dukungan, sehingga agar -agar dikurung dalam bentuk puncak seruling dengan taco atau latar belakang kecil dan lebih banyak bezel.

PH akhir dari sitrat sedang adalah 6,9 (warna hijau). Media ini sangat sensitif terhadap perubahan pH.

PH 6 atau di bawah, medium menjadi warna kuning. Warna ini tidak diamati dalam uji bakteri.

Dan pada pH 7,6 atau lebih, medium berubah warna biru Prusia yang intens.

Menggunakan

Agar Simmons Citrate digunakan untuk mengidentifikasi mikroorganisme tertentu, terutama basil milik keluarga Enterobacteriaceae dan basil glukosa non -order.

Pertimbangan akhir

Media Simmons Citrate adalah tes yang sangat rumit, karena positif palsu dapat diperoleh jika beberapa kesalahan dilakukan.

Perawatan yang harus diambil adalah sebagai berikut:

Inoculo

Inokulum bakteri yang sangat tebal atau dimuat tidak boleh dilakukan, karena dapat menyebabkan warna kuning tembaga berkembang di tempat yang ditaburkan, tanpa mempengaruhi sisa media, tetapi dapat percaya bahwa ada pertumbuhan. Itu tidak berarti bukti kepositifan. 

Demikian juga, inokulum tebal dapat menghasilkan positif palsu, karena senyawa organik yang telah dibentuk sebelumnya dalam dinding sel bakteri morbounder dapat melepaskan karbon dan nitrogen yang cukup untuk mengubah indikator pH.

Oleh karena itu, yang ideal adalah menabur menggunakan jarum alih -alih pegangan platinum, untuk menghindari mengambil kelebihan material.

Dapat melayani Anda: rantai makanan hutan

Ditabur

Di sisi lain, ketika baterai tes biokimia untuk identifikasi mikroorganisme yang dipertanyakan adalah menabur, penting bahwa tes sitrat adalah yang pertama untuk diinokulasi, untuk menghindari hambatan protein atau karbohidrat dari media lain dari media lain.

Dalam keadaan ini, dimungkinkan untuk mendapatkan positif palsu, karena salah satu zat ini yang diperkenalkan oleh kesalahan akan dimetabolisme dan akan menyebabkan perubahan pH.

Cara lain untuk menghindari seret zat adalah dengan membakar pegangan dan mengambil inokulum baru antara satu tes dan lainnya.

Perawatan juga harus diambil saat menyentuh koloni untuk melaksanakan inokulum, karena harus dihindari untuk menyeret sebagian agar tanaman dari mana bakteri datang, karena yang dijelaskan di atas.

Dalam hal ini, Matsen, Sherris dan Branson merekomendasikan untuk mengencerkan inokulum dalam larutan fisiologis sebelum menginokulasi uji sitrat untuk menghindari transfer sumber karbon lainnya.

Intensitas warna

Harus diperhitungkan bahwa intensitas warna yang dihasilkan ketika tes positif dapat bervariasi sesuai dengan rumah komersial.

Selain itu, ada mikroorganisme yang positif pada 24 jam, tetapi ada strain lain yang membutuhkan 48 jam atau lebih untuk menghasilkan perubahan pH.

Referensi

1. Bbl simmons sitrat slants agar. BD pulih.com.
2. Simmons Citrate Agar. Pulih dari Britanialab.com.