Agar Count Standard Foundation, Persiapan dan Penggunaan

Dia standar agar Ini adalah media kultur yang solid dan tidak selektif, yang dirancang untuk kuantifikasi beban mikroba aerobik yang ada di perairan konsumen, air limbah, minuman susu, di antara makanan lainnya. Media ini juga dikenal sebagai PCA Agar) karena akronimnya dalam agar Plat Bahasa Inggris Agar. Itu dibuat pada tahun 1953 oleh Buchbinder, Baris dan Goldstein.

Media akun standar terdiri dari ekstrak ragi, tripteine, glukosa, agar dan air suling. Formulasi ini mengandung elemen dasar nutrisi yang memungkinkan pengembangan beban mikroba aerobik yang tidak menuntut saat ini.

Pengenceran desimal untuk penghitungan penghitungan UFC. Sumber: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/3.0)]

Karena media tidak mengandung inhibitor, bakteri dapat berkembang tanpa batasan apa pun, jadi sangat ideal untuk jumlah koloni umum. Namun, teknik kuantifikasi plak tidak akan mendeteksi semua bakteri yang ada, tetapi hanya mereka yang mampu tumbuh dalam kondisi lingkungan yang menjadi sasaran agar -agar menjadi sasaran.

Dalam hal ini, teknik kuantifikasi plak biasanya ditentukan oleh jumlah bakteri tipe mesofil aerobik, yaitu, yang dikembangkan dalam suhu antara 25 dan 40 ° C, dengan suhu pertumbuhan yang optimal pada suhu 37 ° C.

Kelompok bakteri ini sangat penting, karena ada sebagian besar bakteri patogen untuk manusia.

Perlu dicatat bahwa kadang -kadang bunga mengukur jumlah bakteri psikrofilik yang ada dalam makanan. Bakteri ini adalah mereka yang berkembang pada suhu rendah (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Demikian juga, bakteri termofilik, yang berkembang dalam kisaran antara 50 ° C pada 80 ° C atau lebih, dapat menjadi penting dalam jenis makanan tertentu seperti kalengan.

Kuantifikasi mikroba dinyatakan dalam unit bentuk usus besar (UFC) per gram atau sampel mililiter.

[TOC]

Dasar

Akun standar ini dirancang untuk memungkinkan pengembangan memuaskan bakteri aerobik yang tidak menuntut, karena ekstrak ragi, tripteine ​​dan glukosa memberikan nutrisi yang diperlukan untuk pengembangan mikroba yang baik.

Ini dapat melayani Anda: Alizarina: Karakteristik, Persiapan, Penggunaan dan Toksisitas

Di sisi lain, medium memiliki warna terang dan penampilan transparan, jadi sangat ideal untuk visualisasi koloni yang dikembangkan dengan metode yang ditanam dalam -dua (tumpahan pelat).

Mungkin juga koloni yang dihitung dengan metode yang ditanam permukaan dengan drigalski spatula.

Ketika beban mikroba tinggi, pengenceran desimal dari sampel yang diteliti harus dilakukan agar dapat melakukan jumlah UFC.

Perlu dicatat bahwa media ini direkomendasikan oleh American Public Health Association (APHA) untuk jumlah Aerobik Messofil.

Persiapan

Berat 23,5 gr dari media dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Untuk melarutkan sepenuhnya campuran harus dipanaskan dengan sering melambai sampai mendidih. Langkah -langkah berikut bergantung pada teknik yang ditanam yang akan digunakan.

Untuk teknik pembuangan piring

Distribusikan dengan memberikan 12 hingga 15 mL tabung reaksi. Selanjutnya, sterilisasi dalam autoclave pada 121 ° C selama 15 menit. Biarkan menguat secara vertikal dalam bentuk taco. Simpan sampai digunakan.

Lelehkan taco saat akan digunakan. Setelah Anda dapat menyimpannya di Maria hingga 44-47 ° C saat sampel disiapkan.

Untuk permukaan ditanam

Mensterilkan media dalam autoklaf pada 121 ° C dan kemudian mendistribusikan 20 mL dalam pelat steril petri. Biarkan menguatkan, berinvestasi, dan simpan di lemari es sampai digunakan.

Meremukkan pelat sebelum menggunakan. PH medium harus 7,0 ± 0,2.

Menggunakan

Akun standar digunakan dalam teknik penghitungan mesofilik aerobik selama analisis mikrobiologis air dan makanan. Akun mesofilo aerobik diperlukan, karena menentukan kualitas kesehatan sampel yang diteliti.

Penerapan teknik ini (menggunakan media ini) memungkinkan visualisasi makroskopik koloni yang terisolasi untuk kuantifikasi.

Teknik pelepasan pelat (ditaburkan dengan kedalaman)

-Prosedur

Teknik ini terdiri dari yang berikut:

1) Homogenisasi sampel untuk mendistribusikan kembali bakteri yang ada.

2) Suspensi awal dilakukan dalam botol atau kantong steril, menghormati rasio 10 gr atau 10 mL dalam 90 mL pengencer (10^-1).

Itu bisa melayani Anda: fikologi

3) Dari suspensi awal, pengenceran desimal yang relevan dibuat tergantung pada jenis sampel. Mis: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Pengenceran dilakukan dengan air peptonada atau larutan buffer fosfat.

Untuk ini^-2 dan seterusnya.

4) 1 ml setiap pengenceran diambil dan ditempatkan pada piring petrie steril kosong.

5) Tambahkan ke setiap pelat 12 hingga 15 ml agar -agar yang sebelumnya cair dan beristirahat pada 44 - 47 ° C.

6) Berikan gerakan putar lunak ke pelat untuk mendistribusikan sampel di sebelah agar secara merata dan biarkan menguatkan.

7) Investasikan pelat dan inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam.

8) memuncak waktu mulai memeriksa pelat dan menghitung koloni dalam pengenceran yang memungkinkannya. Pelat yang memiliki antara 30 hingga 300 UFC dipilih untuk akun tersebut.

Hitungan dapat dibuat manual atau dapat menggunakan tim akuntan koloni.

Nilai -nilai yang diizinkan oleh ML sampel dapat bervariasi dari satu negara ke negara lain sesuai dengan aturan yang dengannya mereka diatur.

-Perhitungan UFC

Perhitungan umum dilakukan dengan menggunakan rumus berikut:

Formula untuk Perhitungan Umum Kuantifikasi UFC. Sumber: Administrasi Obat Nasional dan Teknologi Medis (Anmat). Analisis Mikrobiologis Makanan, Metodologi Analitik Resmi, Indikator Mikroorganisme. Volume 2014 3. Tersedia di: Anmat.Pemerintah.ar

Ekspresikan hasil dalam 1 atau 2 digit, dikalikan dengan basis 10 yang sesuai. Contoh: Jika hasilnya 16.545 dibulatkan berdasarkan digit ketiga di 17.000 dan akan dinyatakan sebagai berikut: 1,7 x 10⁴. Sekarang, jika hasilnya 16.436 dibulatkan ke 16.000 dan mengekspresikan 1.6 x 10⁴.

Teknik ditanam permukaan

-Prosedur

-Inokulasi dengan 0,1 mL sampel langsung jika cair, suspensi awal 10^-1 atau pengenceran berturut -turut 10^-2, 10^-3 dll, di tengah pelat akun standar.

Dapat melayani Anda: flora dan fauna Tamaulipas: spesies yang lebih representatif

-Distribusikan sampel dengan drigalski spatula atau batang kaca dalam bentuk l. Diamkan selama 10 menit.

-Investasikan pelat dan inkubasi dalam aerobiosis pada suhu 37 ° C selama 24 hingga 48 jam.

-Lanjutkan untuk menghitung koloni, pilih pelat yang berada dalam kisaran antara 20 - 250 UFC.

-Perhitungan UFC

Untuk perhitungan faktor pengenceran diterapkan, yang merupakan kebalikan. Jumlah ke 2 digit signifikan dibulatkan (pembulatan menurut digit ketiga) dan dinyatakan dalam daya dasar 10. Misalnya, jika 224 UFC dihitung dalam sampel tanpa pengenceran (10^-1), 22 x 10 dilaporkan¹  UFC, tetapi jika angkanya 225 dilaporkan 23 x 10¹ UFC.

Sekarang, jika 199 UFC dihitung dalam pengenceran 10^-3, 20 x 10 akan dilaporkan⁴ UFC, tetapi jika 153 UFC dihitung dalam pengenceran yang sama akan dilaporkan 15 x 10⁴ UFC.

Qa

Media akun standar dapat dievaluasi menggunakan strain yang diketahui bersertifikat, seperti: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella Flexneri ATCC 12022.

Jika media kultur dalam kondisi optimal, pertumbuhan yang memuaskan diharapkan dalam semua kasus, dengan pengecualian L. Fermentum yang dapat memiliki kinerja reguler.

Untuk mengevaluasi sterilitas media kultur, satu atau dua pelat dari masing -masing lot yang disiapkan (tanpa inokulasi) pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam harus diinkubasi. Setelah waktu ini, tidak ada pertumbuhan atau perubahan warna medium yang harus diamati.

Batasan

-Jangan melelehkan agar lebih dari sekali.

-Media yang disiapkan dapat bertahan hingga 3 bulan selama tetap di lemari es dan dilindungi dari cahaya.

-Media ini tidak cocok untuk menuntut mikroorganisme, atau anaerob.

Referensi

1. Administrasi Nasional Obat -obatan Makanan dan Teknologi Medis (Anmat). Analisis Mikrobiologis Makanan, Metodologi Analitik Resmi, Indikator Mikroorganisme. Volume 2014 3. Tersedia di: Anmat.Pemerintah.ar
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melguizo, S.KE. Agar Plate Count. 2009. Tersedia di: http: // f-soria.adalah
3. Laboratorium Conda Pronadisa. Agar untuk Metode Standar (PCA) Menurut APHA dan ISO 4833. Tersedia di: Condalab.com
4. Laboratorium Britania. Jumlah pelat agar. 2015. Tersedia di: Britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B dan Velázquez atau. 2009. Teknik untuk Analisis Mikrobiologis Makanan. Edisi ke -2. Fakultas Kimia, Unam. Meksiko. Tersedia di: depa.Fquim.Unam