Agar Lia (Iron Lysina) Apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Agar Lia (Besi lysina) Ini adalah tes biokimia yang digunakan untuk identifikasi bakteri keluarga Enterobacteriaceae. Media ini dibuat oleh Edwards dan Fife, berdasarkan formula Falkow.

Awalnya tes ini adalah kaldu yang mengandung pepton, ekstrak ragi, glukosa, l-lisin, bromokres dan ungu air suling. Edwards dan Fife menambahkan agar-adagar, ferrik citratus amonium dan natrium tiosulfat.

Tes positif dan negatif dari dekarboksilasi lisin. Sumber: Foto dan skema yang dimiliki oleh penulis MSC. Marielsa Gil

Tes ini pada dasarnya terdiri dari menunjukkan keberadaan enzim rudboxylase, yang mampu bereaksi dengan gugus karboksil asam amino L-lisin. Deaminasi asam amino juga dapat terjadi karena adanya patah hati enzim lisin.

Selain itu, komposisi media memungkinkan untuk menunjukkan kemampuan beberapa genera bakteri untuk menghasilkan hidrogen sulfida. Akhirnya, dimungkinkan juga untuk mengamati generasi atau tidak dari gas di tengah.

Dasar

Ekstrak Peptonas dan Ragi

Seperti kebanyakan media tanaman, agar zat besi lisine mengandung komponen yang menyediakan sumber nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Komponen -komponen ini diwakili oleh pepton dan ekstrak ragi.

Glukosa

Demikian juga, agar ini mengandung glukosa karbohidrat yang dapat difermentasi. Diketahui bahwa semua bakteri keluarga Enterobacteriaceae memfermentasi glukosa.

Langkah ini sangat penting, karena akan bertugas untuk mengasamkan lingkungan, kondisi yang sangat diperlukan untuk enzim lisin dekarboksilase - jika ada - bertindak pada substratnya.

Dalam beberapa genre bakteri, produksi gas dapat diamati karena fermentasi glukosa.

Gas dibuktikan saat perpindahan agar -agar OCC.

Dapat melayani Anda: biomaterial

L-Lisina

Setelah lisin didekarboksilasi, diamine (kadaverin) dan anhidrida karbonik terbentuk.

Discallishing terjadi dengan adanya koenzim piridoksal fosfat. Reaksi ini tidak dapat diubah.

Indikator pH (bromocresol ungu)

Semua perubahan pH terjadi di tengah oleh berbagai reaksi, terdeteksi oleh indikator pH pH bromokresol.

Dalam hal ini, ketika ada pengasaman, medium menjadi kuning, dan ketika ada alkalisasi, media kembali ke warna ungu atau ungu asli.

Saat patah hati lisin terjadi karena adanya enzim lisin, warna kemerahan terbentuk di permukaan, khas dalam proteus, Providence dan beberapa spesies Morganella.

Hal ini disebabkan oleh fakta bahwa selama proses disaminasi, asam alfa-zo-karbonat terbentuk, yang bereaksi dengan amonium sitrat di hadapan oksigen, yang menyebabkan warna yang disebutkan di atas.

Sitrat besi amonium dan natrium tiosulfat

Di sisi lain, bakteri yang menghasilkan hidrogen sulfida akan menjadi bukti₂S.

Bakteri yang memiliki enzim tiosulfat berkurang memiliki kemampuan untuk bertindak dengan mengurangi natrium tiosulfat saat ini, membentuk sulfit dan hidrogen sulfida (H₂S).

Yang terakhir adalah gas tidak berwarna, tetapi ketika bereaksi dengan garam besi bentuk sulfida logam, yang merupakan senyawa yang tidak larut (endapan hitam yang terlihat).

Namun, kapasitas pelatihan h₂S dengan media ini tidak terlalu dapat diandalkan, karena beberapa bakteri dekarboksilase negatif yang mampu menghasilkan h₂S tidak akan membentuk endapan hitam, karena keasaman medium mengganggu. Oleh karena itu disarankan untuk menguatkan dengan cara lain yang mengandung zat besi.

Dapat melayani Anda: neuron

Interpretasi tes

Rekboksilasi lisin

Tabung harus dibaca setelah diselesaikan 24 jam inkubasi, jika tidak ada risiko salah paham reaksi, melaporkan negatif palsu.

Ingatlah bahwa reaksi pertama yang akan terjadi adalah fermentasi glukosa, oleh karena itu semua tabung setelah 10 hingga 12 jam akan menjadi kuning.

Jika pada akhir waktu inkubasi (24 jam) ada latar belakang kuning dengan permukaan ungu atau ungu, reaksinya negatif. Warna ungu permukaan sesuai dengan alkalisasi medium dengan menggunakan peptones.

Reaksi positif adalah bahwa di mana bagian bawah dan permukaan tabung benar -benar ungu, yaitu, ia kembali ke warna aslinya.

Oleh karena itu, siapa yang menentukan kepositifan tes adalah dasar atau bawah medium. Jika Anda memiliki keraguan tentang warnanya, itu dapat dibandingkan dengan tabung LIA yang tidak diinokulasi.

Deaminasi lisin

Tabung yang menunjukkan patah hati lisin akan memiliki permukaan kemerahan garnet dan latar belakang kuning (asam), atau seluruh tabung Garnet kemerahan.

Reaksi ini ditafsirkan sebagai negatif untuk dekarboksilasi lisin, tetapi positif untuk deaminasi lysina.

Reaksi ini didefinisikan dan ditafsirkan dalam bevel.

Produksi hidrogen sulfida (h₂S)

Reaksi positif diamati oleh penampilan endapan hitam di seluruh tengah atau bagiannya. Umumnya antara liml bezel dan pangkalan.

Jika endapan terjadi di seluruh tabung, itu tidak akan terlihat reaksi lain yang terjadi di tengah.

Pendaftaran hasil

Saat menafsirkan tes, hasilnya dicatat sebagai berikut:

Dapat melayani Anda: Eksperimen Miller dan Urey

Pertama bezel dibaca, lalu latar belakang atau taco, lalu produksi h₂S, dan akhirnya produksi gas.

Contoh: k/a + (-). Ini berarti:

• K: alkali bezel (warna ungu)
• A: Latar belakang asam (kuning), yaitu, reaksi dekarboksilasi negatif dan patah hati negatif.
• +: Produksi hidrogen sulfida
• (-): tanpa gas.

Persiapan

Beratnya 35 gr dari zat besi yang terbaring dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling.

Panas sampai benar -benar larut agar, untuk mendidih selama satu menit sering melambai. Distribusikan 4 ml medium dalam tabung reaksi 13/100 dengan tutup kapas.

Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Hapus dari autoclave dan biarkan dudukan cenderung, sehingga ada dasar yang dalam dan bevel pendek.

Simpan di lemari es 2-8 ° C. Biarkan marah sebelum menabur regangan bakteri.

Warna medium dehidrasi adalah krem ​​dan medium ungu kemerahan yang disiapkan.

PH akhir dari media yang disiapkan adalah 6,7 ± 0.2

Media menjadi kuning dengan pH sama dengan atau kurang dari 5,2, dan ungu pada pH 6,5.

Aplikasi

Tes ini, bersama -sama dengan tes biokimia lainnya, digunakan untuk identifikasi basil dari keluarga Enterobacteriaceae.

Media ditaburkan dengan lurus atau jarum, satu atau dua tusukan dibuat ke bagian bawah tabung, dan kemudian permukaan medium dalam zigzag berdiri.

Ini incuba selama 24 jam pada suhu 35-37 ° C dalam aerobiosis. Jika perlu, itu dibiarkan menginkubasi selama 24 jam lebih.

Ini terutama berguna untuk membedakan spesies citrobacter negatif dari Salmonellas sp.

Referensi

1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri pentingnya klinis. Edisi ke -3. Editorial Pan -American. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.