Sabouraud agar apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Sabouraud agar, Juga dikenal sebagai agar Sabouraud Dextrose, ini adalah media kultur yang solid, terutama diperkaya untuk isolasi dan pengembangan jamur, seperti ragi, jamur dan dermatofit.

Oleh karena itu, media ini tidak dapat hilang di laboratorium mikrobiologi untuk menyelidiki keberadaan jamur patogen atau oportunistik, baik sampel klinis atau non -klinis. Ini juga ideal untuk pertumbuhan bakteri filamen seperti Streptomices dan Nocardias. Penggunaannya sangat luas, karena dapat digunakan dalam mikologi manusia, hewan, sayuran dan industri.

KE. Sabouraud agar tanpa tabur. B. Agar Sabouraud ditanam dengan ragi. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSC. Marielsa Gil

Media ini dibuat pada tahun 1896 oleh dokter kulit yang luar biasa, Raimond Sabouraud, yang menjadi spesialis yang diakui di seluruh dunia dalam gangguan kulit kepala, terutama disebabkan oleh dermatofit.

Penciptaannya sangat penting sehingga telah digunakan sejak saat itu dan dipertahankan hari ini, meskipun dengan beberapa modifikasi.

Meskipun khusus untuk jamur, dalam medium ini bakteri dapat tumbuh, oleh karena itu untuk sampel dengan flora campuran dimasukkannya antibiotik dalam persiapannya diperlukan dan dengan demikian menghambat pertumbuhan flora bakteri yang mungkin ada.

Pilihan antibiotik harus dilakukan dengan hati -hati dan dengan mempertimbangkan jenis jamur yang akan dipulihkan, karena beberapa dihambat di hadapan zat tertentu.

Dasar

Sabouraud dextrose agar adalah sarana bahwa dalam formulasi aslinya selektif, karena 5 pH asamnya.6 ± 0.2 Namun, bakteri dapat dikembangkan, terutama dalam inkubasi yang berkepanjangan.

Medium ini mengandung pepton jaringan pankreas dan jaringan digreatik jaringan hewan, yang menyediakan sumber karbon dan nitrogen untuk pengembangan mikroorganisme.

Ini juga mengandung konsentrasi glukosa tinggi, yang bertindak sebagai sumber energi yang mendukung pertumbuhan jamur di atas bakteri. Semua ini dicampur dengan agar -agar, komponen yang memberi Anda konsistensi yang sesuai.

Di sisi lain, agar sabouraud dextrose dapat selektif jika antibiotik ditambahkan.

Dengan antibiotik, ini sangat berguna dalam sampel luka, bisul terbuka atau sampel di mana kontaminasi bakteri besar dicurigai.

Kombinasi paling banyak digunakan Sabouraud dextrose dengan antibiotik

-Sabouraud Agar dengan kloramfenikol: Ideal untuk memulihkan ragi dan jamur filamen.

-Sabouraud Agar dengan gentamycin dan chloramphenicol: Hampir semua jamur dan ragi filamen tumbuh dalam media ini, dan menghambat sejumlah besar bakteri, termasuk enterobacteria, pseudomonas dan stafilokokus.

-Sabouraud agar dengan sikloheksimida: sangat berguna untuk sampel dari kulit atau saluran pernapasan, selama kecurigaannya adalah jamur dimorfik.

Cycloheximide harus digunakan dengan hati -hati; Meskipun digunakan untuk menghambat pertumbuhan jamur dan ragi non -patogenik atau lingkungan yang mungkin ada sebagai polutan dalam sampel, itu juga menghambat pertumbuhan beberapa jamur seperti Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Alescheria, Penicillium SP dan jamur oportunistik lainnya.

-Agar Sabouraud dengan kloramfenikol plus sikloheksimida: ini terutama digunakan untuk mengisolasi dermatofit dan jamur dimorfik. Memiliki ketidaknyamanan yang menghambat beberapa spesies jamur oportunistik seperti Candida no Albicans, Aspergillus, zigomicetos atau c. Neoformans.

-Sabouraud Agar dengan kloramfenikol, streptomisin, penisilin G dan sikloheksimida: sangat ideal untuk sampel yang sangat terkontaminasi dengan bakteri dan jamur saprofit, tetapi memiliki ketidaknyamanan dalam menghambat pertumbuhan perkembangan Actinomyces dan Nocardias, Selain jamur oportunistik yang disebutkan di atas.

Dapat melayani Anda: Proses Hominisasi: Karakteristik dan Fase

Persiapan

Jika mereka memiliki bahan terpisah, itu dapat disiapkan sebagai berikut:

Sabouraud Dextrose 

Menimbang:

- 40 gr dari dekstrosa

- 10 gr dari pepton

- 15 gr dari agar -agar

- Ukur 1000 ml air suling

Semua bahan dicampur, pH disesuaikan dengan 5.6. Zat terlarut dilarutkan dengan mendidih, 20 mL medium didistribusikan dalam tabung 25 x 150 mm, tanpa memegang dan dengan tutup kapas lebih disukai.

Tabung dengan tutup kapas. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSC. Marielsa Gil

Tindakan tabung lainnya juga dapat digunakan, sesuai dengan ketersediaan.

Mereka mengambil autoklaf selama 10 menit ke atmosfer tekanan (121 ° C). Itu tidak boleh dilampaui dalam waktu yang diarahkan. Saat meninggalkan autoclave, tabung cenderung dengan bantuan dukungan sampai mereka mengeras di puncak seruling.

Cara lain adalah melarutkan bahan dengan memanaskan sampai mendidih. Dalam felola autoklavia yang sama selama 10 menit dan kemudian mendistribusikan 20 mL di piring petri.

Jika media sabouraud dextrose tersedia yang sudah berisi semua bahan, jumlah yang ditentukan oleh rumah komersial untuk satu liter air ditentukan. Sisa langkah sama dengan yang dijelaskan di atas.

Sabouraud Dextrose agar (modifikasi Emmons)

Menimbang:

-  20 gr dari dekstrosa

- 10 gr dari pepton

-  17 gr dari agar -agar

-  Ukur 1000 ml air suling

Semua bahan dicampur, pH disesuaikan dengan 6.9. Lanjutkan dengan cara yang sama dari kasus sebelumnya.

Ada rumah komersial yang menawarkan media dengan semua bahan. Dalam hal ini, timbang dan persiapkan cara insert menggambarkannya.

Sabouraud Dextrose agar (modifikasi Emmons) dengan kloramfenikol

Solusi Ibu Chloranfenicol

- Beratnya 500 mg basis kloramfenikol

- Ukur 100 mL etanol 95%

- Membaur

Media dekstrosa sabouraud (Emmons) disiapkan seperti yang telah dijelaskan dan tambahan untuk setiap liter menambahkan 10 ml larutan ibu klistenfenikol sebelum autoklavia.

Sabouraud Emmons dengan Dextrose Cycloheximide

Solusi Ibu Cycloheximide

- Beratnya 5 gr dari sikloheksimida

- Ukur 100 ml aseton

- Membaur

Apoure Sabouraud Dextrose.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons) dengan kloramfenikol dan sikloheksimida

Media Dekstrosa Sabouraud (Emmons) disiapkan seperti yang telah dijelaskan dan tambahan untuk setiap liter menambahkan 10 mL larutan ibu klistenfenikol dan 10 mL larutan ibu sikloheksimida sebelum dianutoklafasikan.

Dapat melayani Anda: ilmu yang terkait dengan biologi

Antibiotik lain yang bisa ditambahkan

dua puluh.000 hingga 60.000 unit penisilin per liter medium.

30 mg streptomisin per liter medium.

Keduanya harus dimasukkan setelah medium, sedikit didinginkan (50-55 ° C).

0,04 g neomycin per liter medium.

0.04 g gentamicin per liter medium.

Pertimbangan Khusus

Keamanan lebih disukai untuk menabur agar dekstrosa sabouraud di tabung berbentuk baji (cenderung dalam puncak seruling) daripada di piring petri, untuk menghindari dispersi dan inhalasi spora.

Penting bahwa tabung dengan usia sabouraud ditutupi dengan kapas dan bukan dengan tutup benang, karena telah ditunjukkan bahwa kondisi semi -aerob menghambat pembentukan sporum pada beberapa strain, misalnya Coccidioides immitis. Selain itu, sebagian besar jamur adalah aerob.

Jika menggunakan tutup benang, tidak tertutup rapat.

Qa

Media yang disiapkan harus dibuat kontrol kualitas untuk memverifikasi fungsi yang tepat. Untuk ini, strain tertentu ditaburkan.

Untuk Sabouraud Dextrose Candida albicans, yang harus memiliki pertumbuhan yang sangat baik. Piring lain diinokulasi dengan strain dari Escherichia coli, harus sepenuhnya terhambat.

Sebuah plak tanpa inokulasi juga diinkubasi di mana tidak ada mikroorganisme yang akan tumbuh.

Untuk agar dekstrosa sabouraud dengan kloramfenikol dan sikloheksimida  Trichophyton Mentagrophytes, harus berkembang dengan baik. Piring lain diinokulasi dengan strain Aspergillus flavus, di mana harus ada pertumbuhan yang langka atau non -pertumbuhan. Selain itu, plak yang tidak terinokulasi diinkubasi untuk menunjukkan kemandulannya.

Untuk sabouraud dextrose dengan sikloheksimida, strain Candida albicans, Trichophyton Rubrum  salah satu Canis microsporum, yang harus menunjukkan pertumbuhan yang baik.

Demikian juga, strain Aspergillus flavus, menunjukkan pertumbuhan yang langka atau non -pertumbuhan. Akhirnya inkubasi piring tanpa inokulasi untuk kontrol sterilitas.

Aplikasi

Budidaya primer

Agar dekstrosa sabouraud klasik mengandung 4 gr dari dekstrosa dan sangat baik sebagai sarana utama isolasi, karena menunjukkan morfologi karakteristik dari masing -masing jamur.

Ini juga sangat baik untuk menunjukkan produksi pigmen. Namun, ini bukan cara yang paling tepat untuk mengamati sporulasi.

Juga tidak disarankan untuk mengolah Blastomyces dermatitidis, yang dihambat oleh konsentrasi tinggi glukosa saat ini.

Di sisi lain, pertimbangan tertentu harus diingat.

Beberapa jamur berkembang lebih baik pada suhu kamar, seperti cetakan, yang lain berhasil berkembang pada suhu 37 ° C, seperti beberapa ragi, dan yang lain dapat berkembang pada kedua suhu (jamur dimorfik).

Oleh karena itu, terkadang perlu.

Misalnya, Sporothrix Schenckii Itu ditaburkan di dua piring; Satu adalah incuba pada suhu kamar untuk mendapatkan fase cetakan dan yang lainnya diinkubasi pada suhu 37 ° C untuk mendapatkan fase uppaduriform, tetapi dalam yang terakhir perlu menambah darah 5% ke lingkungan.

Itu dapat melayani Anda: oksidase glukosa: karakteristik, struktur, fungsi

Dalam kasus lain, seperti dalam sampel mitos, dua pelat agar Sabouraud ditaburkan, satu dengan kloramfenikol dan lainnya dengan sikloheksimida. Yang pertama akan memungkinkan pertumbuhan agen sebab akibat mitoma asal mitos (eumicetoma) dan agen penyebab kedua miketoma asal bakteri, seperti aktinomiketoma.

Sporulasi

Agar dextrose sabouraud yang dimodifikasi oleh Emmons mengandung 2 gr dari dekstrosa dan tidak hanya berfungsi untuk isolasi, tetapi juga untuk sporulasi dan konservasi jamur.

Di media ini jika Anda dapat memulihkan strain dari Blastomyces dermatitidis.

Konservasi

Untuk menghemat tanaman jamur, mereka dapat disimpan dalam lemari es (2-8 ° C). Waktu konservasi dapat bervariasi antara 2 hingga 8 minggu. Setelah ini mereka harus subyektif untuk mengulangi prosesnya.

Beberapa jamur tetap lebih baik pada suhu kamar, seperti Epidermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T. Violaceum Dan Microsporum audounii.

Pemeliharaan regangan dapat diperpanjang untuk menghindari pleomorfisme jika dekstrosa agar sepenuhnya dihilangkan dan jika jumlah agar ke lingkungan dikurangi untuk menghindari kekeringan.

Mikrokultur

Untuk identifikasi beberapa jamur filamen, perlu untuk melakukan mikrokultur menggunakan Sabouraud agar atau cara khusus lainnya untuk mengamati struktur reproduksi seksual dan aseksual.

Dalam mikologi manusia

Ini terutama digunakan untuk diagnosis penyakit jamur, terutama yang mempengaruhi kulit dan lampirannya (rambut dan kuku).

Sampel dapat berupa sekresi, eksudat, kulit, rambut, kuku, dahak, LC atau urin. Patogen yang umum diisolasi adalah dermatofit, jamur yang menyebabkan mikosis subkutan dan sistemik.

Mikologi Hewan

Hewan sering dipengaruhi oleh infeksi jamur, oleh karena itu Sabouraud agar sama berguna dalam mikologi hewan seperti pada manusia.

Misalnya, dermatofit dapat mempengaruhi hewan. Begitulah kasusnya Canis var distortum microsporum, yang sering menginfeksi anjing, kucing, kuda, babi dan monyet. Selain itu, Microsporum Gypseum menginfeksi anjing, kucing, dan sapi.

Burung seperti ayam, ayam jantan dan ayam dipengaruhi oleh Microsporum gallinae.

Jamur lain, seperti Zymonema farciminosum, Mereka juga menyebabkan penyakit pada hewan, terutama pada kuda, bagal dan keledai, menghasilkan peradangan penting pada pembuluh limfatik.

Sporothrix schenkii dan Histoplasma capsulatum Mereka mempengaruhi hewan rumah tangga dan manusia.

Mikologi Lingkungan

Banyak jamur patogen atau oportunistik dapat berkonsentrasi pada waktu tertentu di lingkungan tertentu, terutama di ruang operasi dan unit perawatan intensif (ICU) klinik dan rumah sakit. Oleh karena itu perlu untuk mengendalikan hal yang sama.

Ruang rentan lainnya adalah perpustakaan dan bangunan lama, yang dapat dipengaruhi oleh konsentrasi jamur lingkungan.

Dalam Studi Lingkungan, Sabouraud Dextrose Agar untuk isolasi jamur digunakan.

Mikologi Industri

Agar sabouraud dextrose tidak dapat hilang untuk studi jamur pencemaran dalam produksi kosmetik, makanan, minuman, kulit, tekstil, antara lain.

Menanam mikologi

Tanaman juga menderita penyakit jamur, mempengaruhi berbagai bagian tanaman, yang bahkan dapat mengakhiri panen, menyebabkan kerugian besar di pertanian.

Referensi

1. Laboratorium Valtek. (2009). Sabouraud Dextrose Agar dengan Cycloheximida. Tersedia di: Andinamedica.com.
2. Navarro atau. (2013). Mikologi Hewan. Universitas Agraria Nasional. Nikaragua.