Agar darah

Pendekatan darah. Dengan lisensi

Apa itu agar darah?

Dia Agar darah Ini adalah media kultur padat yang diperkaya, yang digunakan untuk pemulihan dan pertumbuhan berbagai macam mikroorganisme dari sampel klinis atau subyektif.

Media kultur ini pada dasarnya terdiri dari agar dasar yang diperkaya dan darah domba 5%. Basis agar dapat bervariasi sesuai dengan kebutuhan, tetapi terutama akan terdiri dari peptonas, asam amino, vitamin, ekstrak daging, natrium klorida, agar, antara lain. Adapun darah, darah manusia terkadang digunakan.

Pengumpulan darah dapat disiapkan di laboratorium atau sudah dapat dibeli, dari perusahaan yang didedikasikan untuk itu. Persiapan media ini sangat rumit, setiap kecerobohan dalam elaborasinya akan menghasilkan lot yang terkontaminasi.

Oleh karena itu, semua tindakan pencegahan yang mungkin harus diambil dan pada akhirnya melakukan kontrol kualitas yang menginkubasi 37 ° C 1 pelat per 100 yang disiapkan.

Dasar

Staphylococcus aureus tumbuh dalam agar darah. Sumber: Nathan Reading on Flickr Nathan R. Di Twitter, Wikimedia Commons

Agar darah adalah media yang diperkaya, diferensial, dan non -selektif. 

• Ini adalah media yang diperkaya karena membawa aditif utama 5-10% darah pada dasar agar. Kedua senyawa tersebut mengandung banyak nutrisi yang memungkinkan sebagian besar bakteri yang dapat dibudidayakan tumbuh di dalamnya.
• Pertumbuhan itu terjadi tanpa batasan, jadi itu tidak selektif. Namun, jika senyawa ditambahkan yang mencegah pertumbuhan beberapa mikroorganisme dan mendukung orang lain, itu menjadi selektif. Misalnya, jika jenis antibiotik atau antijamur tertentu ditambahkan.
• Ini berbeda, karena memungkinkan membedakan 3 jenis bakteri: beta-hemolitik, alfa-hemolitik dan gamma-hemolitik.
• Beta-hemolytic adalah mereka yang memiliki kemampuan untuk lisar atau lengkap. Contoh bakteri ß-hemolytic adalah Streptococcus pyogenes Dan Streptococcus agalactiae.
• Alpha-hemolytic adalah yang melakukan hemolisis parsial, di mana hemoglobin dioksidasi menjadi methemoglobin, menghasilkan warna kehijauan di sekitar koloni. Fenomena ini dikenal sebagai hemolisis α atau α-hemolisis, dan bakteri diklasifikasikan sebagai α-hemolitik. Contoh bakteri α-hemolitik adalah Streptococcus pneumoniae Dan Streptococcus dari grup Viridans.
• Bakteri gamma-hemolitik atau non-hemolitik tumbuh di atas agar tanpa menghasilkan perubahan di dalamnya, efek yang dikenal sebagai γ-hemolisis, dan mikroorganisme adalah γ-hemolitik. Contoh bakteri γ-hemolitik: beberapa strain Streptococcus Grup D (Streptococcus bovis dan Enterococcus faecalis).

Aplikasi

• Media kultur ini adalah salah satu yang paling umum digunakan di laboratorium mikrobiologi. Di antara mikroorganisme yang mampu tumbuh dalam media ini adalah: ketat, opsional, mikroaerofilik, anaerob, bakteri gram -positif atau gram -negatif, bakteri pertumbuhan cepat atau pertumbuhan lambat atau pertumbuhan lambat yang lambat.
• Beberapa bakteri yang menuntut atau menjengkelkan juga tumbuh dari sudut pandang nutrisi, serta jamur dan ragi. Ini berguna untuk strain subyektif atau reaktivasi yang secara metabolik sangat lemah.

Dapat melayani Anda: siklopentanoperhydropenantreno: struktur dan pentingnya

Namun, pilihan agen darah dan dasar akan bervariasi tergantung pada mikroorganisme yang cenderung pulih dan penggunaan yang akan diberikan kepada piring (budidaya atau antibiogram).

Pilihan darah

Darah bisa dari domba, kelinci, kuda atau manusia.

Yang paling disarankan adalah darah domba, kecuali untuk beberapa pengecualian. Misalnya, untuk mengisolasi spesies Haemophilus, di mana darah yang direkomendasikan adalah kuda atau kelinci, karena darah domba memiliki enzim yang menghambat faktor V.

Yang paling tidak direkomendasikan adalah manusia, meskipun yang paling banyak digunakan, mungkin karena itu adalah yang termudah untuk diperoleh. 

Darah harus didefibrinasi, diperoleh tanpa aditif dan dari hewan sehat. Untuk penggunaan darah manusia, beberapa faktor harus diingat:

• Jika darah berasal dari individu yang menderita infeksi bakteri, mereka akan memiliki antibodi spesifik. Dalam kondisi ini, kemungkinan pertumbuhan beberapa bakteri akan dihambat.
• Jika diperoleh dari bank darah, itu mengandung sitrat dan ada kemungkinan bahwa bakteri tertentu tidak berkembang di hadapannya.
• Jika darah berasal dari pasien yang menggunakan antibiotik, pertumbuhan bakteri yang rentan dapat dihambat.
• Dan jika darah berasal dari penderita diabetes, kelebihan glukosa mengganggu pola hemolisis yang berkembang dengan benar.

Pilihan Tingkat Basis

Agar dasar yang digunakan untuk persiapan agar darah bisa sangat lebar. Di antara mereka adalah: Agar Nutrisi, Infus Jantung Cerebro, Triptych Soybeans, Müeller Hinton, Thayer Martin, Agar Columbia, Brucella Agar, Campylobacter Agar, dll.

Penggunaan agar darah sesuai dengan media dasar yang digunakan untuk persiapan

Agar nutrisi

Basis ini adalah yang paling tidak digunakan, karena mereka akan tumbuh terutama bakteri yang tidak menuntut, seperti basil enterik, Pseudomonas sp, S. Aureus, Bacillus SP, diantara yang lain. Tidak disarankan untuk mengisolasi Streptococcus.

Cerebro Heart Infusion (BHI)

Ini adalah salah satu yang paling banyak digunakan sebagai basis, karena memiliki nutrisi yang diperlukan untuk pertumbuhan sebagian besar bakteri, termasuk Streptococcus sp dan bakteri menuntut lainnya. Meskipun tidak tepat untuk mengamati pola hemolisis.

Dengan basis ini, darah domba digunakan.

Anda juga dapat menyiapkan varian agar darah, di mana senyawa lain ditambahkan untuk mengisolasi mikroorganisme tertentu. Misalnya, jantung serebro infus dilengkapi dengan darah kelinci, sistin dan glukosa, berfungsi untuk mengisolasi Francisella tularensis.

Sementara, dengan Cistina Telurito, berguna untuk mengisolasi Corynebacterium difteriae. Darah manusia atau domba dapat digunakan.

Dapat melayani Anda: potensi biotik

Dengan yang pertama, beta-trimolisis akan dilihat sebagai halo sempit, sedangkan dengan detik halo akan jauh lebih luas.

Basis ini, bersama dengan bacitracin, tepung jagung, darah kuda dan suplemen pengayaan lainnya (isovalex), digunakan untuk isolasi gender Haemophilus sp Dari sampel pernapasan.

If the combination of chloramphenicol-gentamycin or penicillin-stuffyin antibiotics with horse blood is added, it serves to isolate demanding pathogenic fungi, even with a higher performance to the sabouraud glucose agar. Terutama berguna dalam isolasi Histoplasma capsulatum.

Tapisi Treptyse Soy

Basis ini adalah yang paling disarankan untuk mengamati pola hemolisis dan realisasi tes diagnostik, seperti pajak opto -corner dan bacitracine. Ini adalah agar darah klasik yang digunakan oleh rutin.

Dengan basis ini Anda juga dapat menyiapkan agar darah khusus Corynebacterium difteriae, Dengan telurito cistina Dan Darah Domba.

Kombinasi darah agar ini, lebih banyak kanamycin-vankomisin, sangat ideal untuk pertumbuhan anaerob, terutama Bacteroides sp.

Müeller Hinton Agar

Basis tambahan darah ini digunakan untuk melakukan antibiogram mikroorganisme yang menuntut Streptococcus sp. Ini juga berguna untuk mengisolasi bakteri seperti Legionel pneumophila.

Thayer Martin Agar

Media ini sangat ideal sebagai dasar agar darah saat dicurigai genus Neisseria, khususnya Neisseria meningitidis, mengingat bahwa N. Gonorrhoeae Itu tidak tumbuh dalam agar darah. Itu juga berfungsi untuk melakukan tes kerentanan Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Basis ini sangat baik untuk menabur sampel biopsi lambung untuk mencari Helicobacter pylori.

Media sedang mempersiapkan 7% darah domba defibrinat dengan antibiotik (vankomisin, trimetoprim, amfoterisin B dan cefsulodin) untuk membatasi pertumbuhan jenis bakteri lain yang mungkin ada.

Basa yang sama ini dilengkapi dengan darah manusia atau domba, nalidíxico dan asam colistin berguna untuk diisolasi Gardnerella vaginalis. Ini juga ideal untuk mengevaluasi kerentanan antimikroba terhadap antibiotik mikroorganisme yang sama.

Selain itu, ini berfungsi untuk persiapan agar darah untuk budidaya anaerob, menambahkan aminoglikosida dan vankomisin. Basis ini memungkinkan kita untuk mengamati pola hemolisis dengan benar.

Rag Brucella

Media ini digunakan sebagai basis agen darah, bersama dengan penambahan vitamin K, sangat ideal untuk penanaman bakteri anaerobik. Dalam hal ini, penggunaan darah domba direkomendasikan.

Dapat melayani Anda: Pernapasan Kulit: Karakteristik dan Contoh Hewan

Campylobacter agar

Campylobacter agar yang dilengkapi dengan darah ram 5% dan 5 antibiotik (sefalotin, amfoterisin B, trimetoprim Campylobacter jejuni Dalam sampel feses.

Persiapan

Setiap rumah komersial membawa kebalikan dari kemasan indikasi untuk menyiapkan satu liter media kultur. Perhitungan yang sesuai dapat dibuat untuk menyiapkan jumlah yang diinginkan, sesuai dengan agar basis yang dipilih.

Menimbang dan larut

Agar dasar didehidrasi (dalam debu), oleh karena itu harus dilarutkan dalam air suling yang disesuaikan dengan pH 7,3.

Jumlah yang ditunjukkan oleh agar dasar yang dipilih ditimbang dan dilarutkan dalam jumlah air yang sesuai dalam fixola, kemudian dipanaskan di atas api sedang dan bercampur dengan gerakan putar sampai seluruh debu.

Mensterilkan

Setelah larut, sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 20 menit.

Agregat darah

Saat meninggalkan autoclave, fixola akan didinginkan sampai suhu berkisar antara 40 hingga 50 ° C. Ini adalah suhu yang mendukung kulit manusia, dan pada saat yang sama agar belum dikuatkan.

Untuk melakukan ini, fixola disentuh dengan tangan dan jika panas dapat ditoleransi, itu adalah suhu yang ideal untuk menambahkan darah defibrinated yang sesuai (50 mL per liter agar). Campur untuk homogenisasi.

Bagian dari agregat darah sangat penting, karena jika dilakukan ketika mediumnya sangat panas, sel darah merah akan pecah dan media tidak akan berfungsi untuk mengamati hemolisis.

Jika ditambahkan terlalu dingin, benjolan akan terbentuk dan permukaan medium tidak akan halus untuk dapat membuat striatum dengan benar.

Tuang ke piring Petri

Sajikan dalam pelat petri steril segera setelah menghomogenisasi darah. Di setiap pelat petri sekitar 20 ml dituangkan. Prosedur ini dilakukan dalam lonceng aliran laminar atau di dekat yang lebih ringan.

Pada saat menyajikan darah di piring Petri, gelembung udara tidak boleh dibiarkan di permukaan plak. Jika ini terjadi, nyala korek api Bunsen dilewatkan dengan cepat di atas piring untuk menghapusnya.

Pelat dibiarkan memadatkan dan disimpan dalam lemari es (2-8 ° C) terbalik sampai digunakan. Sebelum menggunakan pelat agar darah, mereka harus marah untuk dapat menabur.

Piring yang disiapkan memiliki perkiraan durasi 1 minggu.

Referensi

1. Bayona, m. Kondisi mikrobiologis untuk budidaya Helicobacter pylori. Putaran. Kubis. Gastroenterol. 
2. Forbes, B ,, Sahm, D., Weissfeld, a. Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.KE.