TCBS Agar Apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia TCBS Agar Ini adalah kultur padat yang sangat selektif dan diferensial, digunakan untuk isolasi dan budidaya bakteri genus Vibrio, khususnya Vibrio cholerae, v. Vulnificus Dan V. parahaemolyticus sebagai patogen utama genre ini.

Akronim TCBS berarti thiosulfate empedu sitrat. Agar ini juga dikenal sebagai media selektif untuk getaran. Formula asli dibuat oleh Nakanishi dan kemudian dimodifikasi oleh Kobayashi.

Ini terdiri dari ekstrak ragi, pepton daging, triptein, natrium sitrat, natrium tiosulfat, empedu sapi, sukrosa, natrium klorida, sitrat besi, biru bromool, biru thymol dan agar.

Komposisi ini memungkinkan pengembangan spesies vibrium yang memadai dari sampel air, makanan dan tinja; kecuali Vibrio Hollisae, Itu tidak tumbuh di media ini. Selain itu, media TCBS mampu menghambat pertumbuhan bakteri lain yang menyertainya, terutama coliform.

Karena masalah gastrointestinal dan ekstra-intestinal yang serius yang dihasilkan oleh beberapa spesies genus Vibrio, diagnosis mereka sangat penting. Manusia terutama terinfeksi dengan konsumsi makanan mentah atau sedikit yang dimasak atau air yang terkontaminasi, tetapi juga melalui infeksi luka.

Karena itu, laboratorium klinis harus mencakup agar TCBS dalam studi kopoult sampel tinja cair, terutama dengan penampilan air padi. Terutama jika pasien mengacu pada kontak dengan air laut atau mengonsumsi kerang atau ikan.

Dasar

Ekstrak ragi, pepton daging, dan tripteína, adalah sumber bergizi dari media ini. Namun, agar TCBS adalah media yang tidak ramah bagi sebagian besar bakteri.

Selektivitasnya yang tinggi diberikan oleh agregat natrium sitrat dan empedu sapi; Keduanya adalah agen penghambat yang juga menyediakan pH alkali untuk medium, membatasi pertumbuhan flora yang menyertainya dan mendukung pertumbuhan V. Kolerae, di antara spesies lain. Terutama Vibrio cholerae sangat sensitif terhadap keasaman.

Untuk bagiannya, natrium klorida menyeimbangkan keseimbangan osmotik ke lingkungan. Selain itu, karena konsentrasinya tinggi, ia juga bertindak sebagai agen inhibitor, mendukung pertumbuhan bakteri halofil.

Tars adalah gula yang dapat difermentasi yang bersama -sama dengan indikator pH biru -bromotimol biru dan biru memberikan karakter diferensial sedang. Untuk alasan ini, dengan media ini dimungkinkan untuk membedakan strain fermentasi dari non -fermentasi.

Koloni dari galur fermentaris sukrosa berkembang dalam warna dan akan mengubah media dari hijau menjadi kuning dengan produksi asam. Pertumbuhan tembus pandang non -ferment dan sisa -sisa warna asli (hijau).

Demikian juga, media ini mengandung natrium tiosulfat sebagai sumber belerang dan sitrat besi sebagai zat pengungkap. Keduanya menunjukkan bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tidak berwarna). H₂S dibentuk dari tiosulfat dan kemudian bereaksi dengan ferric citrate endapan hitam yang terlihat terbentuk.

Akhirnya, agar adalah yang memberikan konsistensi yang kuat terhadap lingkungan.

Persiapan

Beratnya 89 gr dari media dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Membantu pembubaran untuk sering pemanasan dan agitasi. Campuran dapat direbus hingga 2 menit.

Media ini tidak autoklava. Setelah solusinya disajikan langsung di piring steril. Dengan memperkuat mereka dipesan dengan cara terbalik dalam trombosit dan disimpan dalam lemari es (2-8 ° C) sampai digunakan.

Media setelah disiapkan harus pada pH 8,6 ± 0,2.

Warna medium dehidrasi adalah krem ​​ringan atau hijau krem, dan warnanya adalah hutan hijau atau hijau biru.

Penting untuk membiarkan pelat meredam sebelum menabur sampel.

Menggunakan

Sampel yang paling umum untuk isolasi yang dinamis adalah kotoran diare.

Sampel bangku tidak dapat ditanam segera di lingkungan selektif, mereka harus diangkut di tengah Cary Blair.

Untuk meningkatkan sensitivitas tanaman, tinja dapat dilewati oleh air Peptonada ke pH 8.4 sebagai sarana pengayaan selama 8 jam maksimal, dari sana subyektif ke media TCBS.

Juga harus diingat bahwa beberapa strain yang dinamis dapat menyebabkan septikemia pada pasien imunosupresi, oleh karena itu mereka dapat diisolasi dari kultur darah. Demikian juga, sampel makanan dan makanan dari laut dapat dianalisis ketika ada wabah epidemi penyakit kolera.

Ditabur

Inokulum sampel yang diteliti harus menonjol, yang ditabur dilakukan dengan metode strying kelelahan. Pelat diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 24 jam dalam aerobiosis.

Koloni dugaan Vibrio cholerae Mereka adalah tepi yang sedang, halus, buram, tipis dan berwarna kuning karena mereka memfermentasi sukrosa.

Demikian pula menumbuhkan spesies dari V. Alginolyticus, V. sungai, V. Harareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furnissii, v. Metschnikovii dan beberapa V. Vulnificus. Spesies lain yang penting secara klinis seperti V. parahaemolyticus Mereka tidak memfermentasi sukrosa, berkembang sebagai koloni hijau zaitun.

Di sisi lain, harus diingat bahwa beberapa strain aeromon dan plesiomon yang merupakan oksidase (+) dapat tumbuh dalam media ini, mengembangkan koloni kuning yang dapat membingungkan dokter. Sementara beberapa strain pseudomonas juga oksidase (+) tumbuh sebagai koloni hijau dan juga V. parahaemolyticus.

Keterbatasan

Tes oksidase yang positif untuk genus Vibrio tidak boleh dilakukan dari koloni yang diperoleh dari agar TCBS, karena hasil yang diperoleh akan menjadi negatif palsu. Senyawa medium sangat mengganggu dalam tes ini. Oleh karena itu, itu harus dilakukan dari subjek dalam agar darah.

Qa

Untuk membuktikan bahwa media dalam kondisi baik itu disarankan.

Untuk ini Anda dapat menggunakan strain dari:

-Vibrio cholerae - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning, tepi tembus cahaya).

-Vibrio parahaemolyticus - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni dengan pusat hijau dan tepi tembus cahaya).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - Pertumbuhan yang memuaskan (koloni kuning dengan lingkaran cahaya dengan warna yang sama di sekitar koloni).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Penghambatan total atau parsial (koloni kuning kecil atau tembus cahaya).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Penghambatan parsial atau total (koloni biru).

-Escherichia coli ATCC 25922 - benar -benar terhambat.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Penghambatan total atau parsial. (Koloni Kecil Tepi Tepi Tepi Hijau).

Inkubasi media tanpa inokulasi tidak boleh memiliki perubahan.

Referensi

1. Laboratorium BD. Bd. TCBS Agar. Tersedia di: BD.com
2. Laboratorium Britania. TCB sedang. Tersedia di: Britanialab.com