Thayer Martin Agar Apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Thayer Martin Agar Ini adalah media padat yang sangat bergizi dan selektif untuk isolasi Neisseria Meningitidis dan Neisseria Gonorrhoeae; keduanya dikenal sebagai kepentingan patogen atau klinis.

Salah satu fitur khusus terpenting yang disajikan oleh Thayer Martin Agar adalah kandungannya yang tinggi dalam suplemen bergizi. Properti ini sangat diperlukan, karena neisseries sangat menuntut mikroorganisme dari sudut pandang nutrisi dan karenanya tidak tumbuh di media umum.

Di sisi lain, karena mikroorganisme ini biasanya ditemukan di daerah non -steril, penambahan inhibitor yang mencegah pertumbuhan flora yang menyertainya diperlukan, tanpa mempengaruhi pengembangan genus Neisseria.

Agar ini terdiri dari agar dasar GC, hemoglobin, suplemen nutrisi tambahan dan kompleks zat penghambat (antibiotik dan antijamur). Rumah komersial menjual masing -masing suplemen secara terpisah.

Sampel untuk menabur dalam media ini akan tergantung pada mikroorganisme yang sedang dicari. Untuk Neisseria Gonorrhoeae Sampel yang ideal adalah sekresi vagina dan uretra. Sementara untuk Neisseria meningitidis Sampel yang paling banyak digunakan adalah CSF, mengeluarkan faring dan nasofaringeal.

Dasar

Neisseries adalah mikroorganisme yang dikatalogkan sebagai menjengkelkan dan oleh karena itu isolasi mereka sulit.  Oleh karena itu, Thayer Martín adalah media yang kompleks dan masing -masing komponennya memenuhi fungsi yang dijelaskan di bawah ini:

Agar dasar GC

Agar GC mengandung protein pepton, tepung jagung, natrium klorida, dipotassium fosfat. Komponennya memberikan nutrisi dasar untuk pengembangan mikroba, menetralkan asam lemak beracun, berkontribusi untuk mempertahankan keseimbangan osmotik, menentukan pH dan memberikan konsistensi padat terhadap lingkungan.

Hemoglobin

Hemoglobin memberikan faktor V dan X (masing -masing nicotinamide adenine dinucleotide nad dan hemina). Oleh karena itu dalam media ini juga menumbuhkan spesies dari haemophilus. Hemoglobin dapat diperoleh dehidrasi secara komersial atau dapat menambahkan sapi yang baru didefibrinasi ke lingkungan.

Dapat melayani Anda: elemen biogenetik

Suplemen Pengayaan

Di sisi lain, media martin Thayer juga harus ditambahkan suplemen pengayaan, karena nutrisi yang dikandungnya tidak cukup untuk persyaratan genus Neisseria.

Suplemen pengayaan yang paling umum digunakan disebut Isavalex. Ini mengandung glutamin, adenin, NAD, cocarboxylase, guanin, ferrik nitrat, asam p-amino benzoik, vitamin B12, tiamin dan glukosa. Semua senyawa ini diperlukan untuk perkembangan neisseries patogen yang baik.

Inhibitor

Karena ini adalah inhibitor media yang sangat bergizi yang mencegah pertumbuhan mikroorganisme dari flora yang biasa di daerah tersebut dan dengan demikian mendukung isolasi genus Neisseria.

Kompleks inhibitor terdiri dari vankomisin, colistin dan nistatin. Vankomisin menghambat pertumbuhan bakteri positif gram, colistin mencegah perkembangan bakteri negatif Gram seperti pseudomonas dan beberapa neisseries saprofit, dan nistatin bertindak pada ragi sebagai ragi seperti ragi seperti Candida albicans.

Namun, kemudian agar Martin Thayer dimodifikasi; Perubahan terdiri dari penambahan trimetoprim, peningkatan jumlah agar dan agregat glukosa ekstra. Perubahan ini secara signifikan meningkatkan pemulihan spesies Neisseria Gonorrhoeae.

Perlu dicatat bahwa trimetoprim menghambat pertumbuhan genre protein dan pembentukannya yang berkerumun akibatnya. Dalam hal ini, antibiotik adalah yang memberikan karakter selektif untuk medium thayer martin.

Persiapan

Agar asli Martin Thayer

-GC Agar

Beratnya 8,2 gr dari medium GC dehidrasi dan tunda 100 mL. Campur dan rebus selama 1 menit dengan agitasi yang sering larut secara keseluruhan. Sterilkan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Dapat melayani Anda: Proses Hominisasi: Karakteristik dan Fase

-Hemoglobin 2%

Tangguhkan 2 gr hemoglobin dehidrasi dalam 2 atau 3 ml air suling panas untuk membentuk campuran yang seragam. Tambahkan air secara bertahap untuk menyelesaikan volume 100 mL. Suspensi harus homogen sebelum sterilisasi.

Sterilisasi dalam autoclave selama 15 menit.

-Suplemen Pengayaan

Rekonstitusi botol komersial dengan pengencer yang disediakan oleh rumah komersial yang sama. Campur dengan baik. Jumlah Dilue untuk digunakan akan ditentukan dalam instruksi kit.

-Suplemen Penghambatan v.C.N (vankomisin, colistin, nistatin)

Menyusun kembali botol dengan pengencer yang disediakan oleh rumah komersial. Campur dengan baik. Jumlah Dilue untuk digunakan akan ditentukan dalam instruksi kit.

-Siap

Untuk setiap 100 ml agar GC melanjutkan sebagai berikut:

Saat agar GC meninggalkan autoclave, biarkan mendinginkan hingga suhu perkiraan 50 ° C dan tambahkan 2 mL larutan hemoglobin yang disiapkan, 2 mL suplemen pengayaan (isoobalex atau bralex), dan 2 ml suplemen penghambatan (isoobalex atau. Campur dan sajikan dalam piring steril petri.

Biarkan memadat dan simpan di lemari es sampai digunakan.

Warna media yang disiapkan berwarna merah ceri. PH akhir medium adalah 7,2 ± 0,2

Thayer Martin Agar dimodifikasi

Beratnya 8,2 gr dari medium GC dehidrasi dan tunda 100 mL. Tambahkan 1 gr dari agar-air dan tambahkan 0,3 gr glukosa. Campur dan rebus selama 1 menit dengan agitasi yang sering larut secara keseluruhan. Sterilkan campuran dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Siapkan suplemen hemoglobin dan pengayaan seperti dijelaskan di atas.

Suplemen penghambatan yang digunakan adalah V.C.N.T (vankomisin, colistin, nistatin, trimetoprim).

Dapat melayani Anda: teori pra -evolusionis, penulis dan idenya

-Siap

Lanjutkan dengan cara yang dijelaskan untuk agar asli Thayer Martin.

Menggunakan

Thayer Martin Agar harus marah sebelum menabur sampel. Sampel yang umum digunakan adalah eksudat faring, eksudat hidung, vagina, uretra dan/atau dubur dan CSF.

Gunakan sampel yang baru diambil dan buat inokulum yang kuat tentang agar. Sampel ditaburkan secara langsung karena pelepasan material dan kemudian menonjol karena kelelahan di permukaan.

Pelat diinkubasi pada suhu 35-37 ° C selama 24 hingga 48 jam di kendi mikroaerofilia (5% CO₂). Setelah waktu inkubasi pelat diperiksa untuk mencari koloni kecil, penampilan abu -abu dan terkadang mukoid.

Lakukan tes biokimia gram dan konfirmasi untuk koloni yang mencurigakan.

Qa

Untuk melakukan kontrol kualitas, Thayer Martin dapat menggunakan strain mikroba berikut.

Neisseria Gonorrhoeae ATCC 49226 dan Neisseria meningitidis ATCC 13090; Di kedua strain, perkembangan yang memuaskan diharapkan.

Strain berikut juga harus dimasukkan: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 dan Candida albicans ATCC 10231. Dalam semuanya, penghambatan total atau parsial diharapkan dalam media ini.

Batasan

-Perlu diingat bahwa pada bakteri tengah yang resisten terhadap inhibitor yang digunakan dapat tumbuh.

-Ada galur Neisseria Gonorrhoeae yang bisa peka terhadap konsentrasi vankomisin yang digunakan. Karena alasan ini disarankan untuk menggunakan agar cokelat paralel ditambah dengan isovalex, tetapi tanpa inhibitor.

-Ada strain ragi yang tahan nistatine yang dapat tumbuh dalam media ini dan mengganggu isolasi neisseries patogen, terutama gonococci.

Referensi

1. Laboratorium Britania. Thayer Martin Media dimodifikasi. Tersedia di: Britanialab.com