Kaldu tetrasional apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Kaldu tetrationate O TT kaldu adalah media kultur cair selektif untuk pengayaan dan pemulihan jenis genus Salmonella. Itu diciptakan oleh Müeller dan kemudian dimodifikasi oleh Kauffmann, jadi ada orang-orang yang memanggilnya Müeller-Bauffmann Broth.

Media asli mengandung protein peptonas, kalsium karbonat dan natrium tiosulfat. Kauffmann menambahkan garam empedu dan menciptakan modalitas lain dengan hijau cerah. Zat -zat ini menghambat pertumbuhan coliform, meninggalkan media bebas untuk pengembangan bakteri patogen, dalam hal ini Salmonella.

Agregat solusi iodure iodure untuk kaldu tetrationato. Sumber: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/4.0)]

Modifikasi sangat berhasil karena sensitivitas medium meningkat secara signifikan. Oleh karena itu, saat ini berguna untuk pencarian salmonellas dalam semua jenis sampel, tetapi terutama untuk kotoran dan makanan padat atau cair.

Persiapannya terdiri dari dua fase; Media komersial adalah dasar untuk menyiapkan kaldu tetrationato, dan kemudian sehingga tetrationato dapat dibentuk solusi iodure yang melengkapi medium.

American Public Health Association (APHA) merekomendasikan penggunaan kaldu tetrasional yang ditambah dengan hijau cerah untuk pengayaan sampel untuk mencari salmonella, karena lebih selektif daripada kaldu tetrasional dan kaldu selenito.

Secara umum, kaldu tetrasionato sangat ideal ketika keberadaan bakteri genus Salmonella diduga dalam jumlah kecil atau yang dianiaya dengan paparan zat penghambat atau oleh proses industri yang meminimalkan kelayakannya.

Dasar

Pepton yang ada sesuai dengan kasein digreas dan peptik jaringan peptik digreal. Ini menyediakan sumber karbon, nitrogen dan nutrisi secara umum untuk pertumbuhan bakteri.

Dapat melayani Anda: Mastozoologi: Asal, Studi Apa, Contoh Penelitian

Untuk bagiannya, natrium tiosulfat bereaksi dengan larutan iodida untuk membentuk tetrationato. Ini menghambat pertumbuhan coliforms dan mendukung perkembangan bakteri yang mengandung enzim tetrationato reductase, di antaranya adalah gender Salmonella, tetapi juga proteus.

Garam empedu juga bertindak sebagai zat penghambat dari sebagian besar bakteri gram positif dan beberapa gram negatif (coliforms).

Kalsium karbonat menyerap zat beracun yang dihasilkan oleh dekomposisi tetrationato, yang membentuk asam sulfat. Dalam hal ini, kalsium karbonat menetralkan keasaman menjaga pH medium stabil.

Dalam kasus modalitas dengan hijau cemerlang, zat ini meningkatkan kekuatan selektif kaldu tetrasional dengan menghambat mikroorganisme lain selain dari gender Salmonella.

Persiapan

-Kaldu tetrationate

Solusi yodium iodurada

Menimbang:

• 6 gr dari yodium.
• 5 gr dari kalium iodida.

Kalium iodida larut dalam sekitar 5 ml air suling steril, kemudian yodium ditambahkan sedikit demi sedikit saat campuran dipanaskan. Setelah benar -benar larut, siram dengan air suling steril sampai mencapai volume akhir 20 mL.

Setengah dasar untuk kaldu tetrationato

Berat 46 gram media dehidrasi dan tunda dalam 1 liter air suling steril. Campur dan panaskan hingga pembubaran totalnya, hanya dapat mengarah selama beberapa menit. Jangan mensterilkan secara otomatis. Basis medium dibiarkan mendingin hingga 45 ° C kira -kira dan pada saat itu 20 mL larutan iodure ditambahkan.

Setelah menambahkan solusi iodurated ke medium, itu harus segera digunakan. Jika Anda tidak ingin menggunakan seluruh campuran, lanjutkan sebagai berikut:

Dapat melayani Anda: kompetisi intra -spesifik: karakteristik, jenis dan contoh

10 mL media dasar didistribusikan dalam tabung, dan hanya untuk mereka yang akan diinokulasi dengan sampel ditambahkan 0,2 mL larutan iodurasi.

Mereka yang tidak akan digunakan masih dapat disimpan dalam lemari es, namun, karena mediumnya tidak disterilkan, yang ideal adalah menyiapkan jumlah yang tepat yang diperlukan.

Warna medium sebelum menambahkan larutan iodida iodida berwarna putih susu dengan endapan putih dan setelah agregat berwarna coklat dengan endapan padat. Endapan yang diamati normal dan sesuai dengan kalsium karbonat yang tidak larut. PH akhir medium adalah 8,4 ± 0,2.

-Varian kaldu tetrrasionat dengan hijau cerah

Untuk menyiapkan kaldu tetrationato dengan hijau cerah, semua langkah yang dijelaskan di atas dilakukan, tetapi juga akan ditambahkan ke dalam campuran larutan hijau cerah 0,1% yang disiapkan.

Hijau Bersinar

Solusi ini disiapkan sebagai berikut:

Berat 0,1 gr dari hijau cerah dan tunda dalam 100 ml air suling. Panaskan hingga mendidih untuk mencapai pembubaran totalnya. Simpan dalam botol Amber.

Menggunakan

Untuk feses sampel (coproulture) protokol ini sebagai berikut:

Inokulasi 1 gr feses padat atau 1 ml tinja cair dalam tabung dengan 10 ml kaldu tetrasional yang siap digunakan. Peregangan dengan kuat dan inkubasi aerobiosis pada suhu 43 ° C selama 6-24 jam.

Selanjutnya, ambil alikuot 10 hingga 20 μl kaldu dan naik dalam media selektif untuk Salmonella, seperti SS Agar, XLD Agar, Agar Hijau Cerah, Hektoen Enteric Agar, antara lain.

Secara paralel, sarana selektif untuk salmonella harus diinokulasi dengan sampel langsung (feses) tanpa pengayaan. Untuk sampel swab dubur, unduh materi yang dikumpulkan dalam tabung dan lanjutkan dengan cara yang dijelaskan di atas.

Dapat melayani Anda: lipogenesis: karakteristik, fungsi dan reaksi

Untuk sampel makanan berat 10 gr dari makanan padat atau 10 ml makanan cair dan menginokulasi botol dengan 100 mL kaldu tetrasional yang siap digunakan. Lanjutkan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan di atas tetapi inkubasi 37 ° C.

Seperti yang dapat dilihat hubungan antara sampel dan kaldu akan selalu 1:10.

Qa

Untuk menguji media kultur, Anda dapat menggunakan strain yang diketahui kontrol. Yang paling banyak digunakan adalah strain bersertifikat ATCC.

Strain untuk digunakan adalah Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella Abony DSM 4224, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 dan Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Untuk strain Salmonella, perkembangan yang sangat baik diharapkan, sementara Escherichia coli Ini dapat memiliki perkembangan yang lemah atau teratur, dan strain positif gram (Enterococcus dan Staphylococcus) sebagian atau sepenuhnya dihambat.

Rekomendasi

-Karena media ini tidak menghambat pertumbuhan proteus, beberapa laboratorium biasanya menempatkan 40 mg/L novobiocin untuk menghindari perkembangan strain mikroba ini. Antibiotik harus ditambahkan sebelum solusi iodure iodo.

-Setelah menyiapkan media termasuk larutan yodium iodure, seharusnya tidak menghabiskan lebih dari 2 jam untuk diinokulasi.

-Pada saat mendistribusikan media dalam tabung, campuran harus dihomogenisasi secara terus menerus untuk menyadarkan kembali endapan yang terbentuk.

-Dalam sampel yang kurang terkontaminasi, sampel 35-37 ° C diinkubasi, dan dalam sampel yang sangat tercemar inkubasi pada 43 ° C direkomendasikan.

Referensi

1. BBL Media. 2005. Disiapkan dalam tabung untuk penanaman spesies Salmonella.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.