Agar tsi apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia TSI Agar o Triple Sugar Iron Agar adalah media kultur padat yang berfungsi sebagai tes biokimia untuk memandu identifikasi awal basil gram negatif. Itu didasarkan pada bukti.

Komposisi dan fondasinya sangat mirip dengan uji Hierro Kigler, dengan perbedaan yang hanya mengandung glukosa dan laktosa. Di sisi lain, -seperti namanya menunjukkan - agar triple Sugar Agar mengandung tiga karbohidrat yang dapat difermentasi: glukosa, laktosa dan sukrosa.

Selain itu, media TSI memiliki empat turunan protein yang menjadikannya agar yang sangat bergizi: ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton dan protein pepton. Ini juga mengandung amonium sulfat ferrous, natrium tiosulfat, natrium klorida, fenol merah dan agar.

Ketidakmampuan mikroorganisme dalam memfermentasi glukosa yang ada di lingkungan segera mengecualikannya dari milik keluarga Enterobacteriaceae. Oleh karena itu, tes ini sangat penting untuk memutuskan rute identifikasi mana yang harus diambil untuk menentukan jenis kelamin dan spesies.

Setiap laboratorium memutuskan apakah itu bekerja dengan TSI Agar atau dengan Kligler Hierro.

Dasar

Masing -masing senyawa memenuhi fungsi dalam medium.

Sodium dan agar klorida

Sodium klorida diperlukan untuk menjaga keseimbangan osmotik medium. Sedangkan agar memberi Anda konsistensi yang kuat.

Indikator pH (fenol merah)

Medium pH yang disiapkan seimbang pada 7,3 dan indikator pH (fenol merah) berubah kuning di bawah 6.8. Ini berarti bahwa sejumlah kecil asam yang dihasilkan oleh fermentasi gula akan mengubah medium merah-oranye menjadi kuning.

Jika tidak terjadi fermentasi akan ada alkalisasi media karena penggunaan pepton, berputar dari oranye merah menjadi merah kuat.

Turunan protein (ekstrak ragi, ekstrak daging, pepton dan protein pepton)

Ketika bakteri memetabolisme protein yang ada dalam agar TSI, amina diproduksi yang mengubah media (terutama pada tingkat bezel), karena reaksi membutuhkan oksigen. Amina mengubah bezel menjadi merah kuat.

Tapi ini akan tergantung pada kemampuan fermentasi bakteri atau tidak karbohidrat.

Fermentasi karbohidrat (glukosa, laktosa dan sukrosa)

Studi fermentasi gula dapat memberikan beberapa gambar dan masing -masing ditafsirkan secara berbeda. Interpretasi uji membagi mikroorganisme menjadi 3 kategori: fermentor non -glukosa, fermentor non -laktosa dan fermentor laktosa/sukrosa.

Perlu dicatat bahwa jumlah glukosa di tengah terbatas, sedangkan konsentrasi laktosa dan sukrosa 10 kali lebih tinggi.

Bakteri keluarga Enterobacteriaceae dan mikroorganisme fermentasi glukosa lainnya akan mulai memfermentasi gula ini karena karbohidrat paling sederhana adalah mendapatkan energi untuk mendapatkan energi.

Dapat melayani Anda: solusi isotonik: komponen, persiapan, contoh

Di sisi lain, laktosa dan sukrosa adalah karbohidrat kompleks yang harus terurai dan menjadi glukosa sehingga mereka dapat memasuki siklus Embden-Meyerhof.

-Mikroorganisme non -fermentaris

Ketika mikroorganisme yang diinokulasi tidak dapat memfermentasi glukosa, apalagi dapat memfermentasi karbohidrat lainnya. Oleh karena itu, asam tidak terbentuk di sini, tetapi ada pembentukan amina di bezel karena penggunaan peptones.

Dalam hal ini, bevel menjadi kuat.

Interpretasi: K / K berarti latar belakang bevel / alkali atau netral alkali atau latar belakang netral

Pada gambar yang ditemukan di awal artikel, lihat gambar tabung D.

Hasil ini menunjukkan bahwa mikroorganisme bukan milik keluarga Enterobacteriaceae.

-Mikroorganisme non -laktosa/sukrosa

Jika bakteri mampu memfermentasi glukosa tetapi tidak laktosa atau sukrosa, berikut ini akan terjadi:

Bakteri akan mengkonsumsi semua glukosa yang ada setelah sekitar 6 hingga 8 jam, mampu mengasamkan bezel dan taco; Artinya, agar akan benar -benar menguning. Tetapi ketika glukosa habis dan diberi ketidakmungkinan menggunakan laktosa dan sukrosa, bakteri akan memulai metabolisme protein.

Reaksi ini membutuhkan oksigen, jadi degradasi peptonas terjadi pada permukaan (bezel). Amina diproduksi alkleinize Bevel yang berliku kuning menjadi merah. Reaksi ini dibuktikan pada 18 hingga 24 jam inkubasi.

Interpretasi: K/A berarti bezel alkali dan taco asam.

Pada gambar yang ditemukan di awal artikel, lihat gambar tabung b.

-Mikroorganisme fermentasi fermentasi/sukrosa

Mikroorganisme yang mampu memfermentasi laktosa dan sukrosa jelas dapat memfermentasi glukosa. Setelah jumlah minimal glukosa yang ada dalam medium habis, piruvat yang terbentuk mulai memetabolisme untuk membentuk asam melalui siklus aerobik Krebs, dan dalam periode 8 hingga 12 jam seluruh media akan berwarna kuning.

Jika bakteri mampu membuka laktosa atau sukrosa, asam akan terus diproduksi, dan setelah 18 hingga 24 jam seluruh tabung -bisel dan taco akan melanjutkan kuning.

Perlu dicatat bahwa penggunaan glukosa diperlukan.

Interpretasi: A/ A berarti latar belakang asam bevel/ asam. Dapat menyajikan gas atau tidak.

Pada gambar yang ditemukan di awal artikel, lihat gambar tabung a.

Dapat melayani Anda: sitosin: struktur, fungsi, sifat, sintesis

Produksi gas

Beberapa mikroorganisme mampu memproduksi gas selama fermentasi gula. Gas dibuktikan dalam tabung karena tekanan yang diberikannya di dalam agar. Tekanan menyebabkan pembentukan gelembung atau perpindahan agar. Terkadang pembentukan gas dapat patah ke lingkungan.

Penting bahwa ketika menabur media TSI, tusukan dilakukan dengan bersih melalui pusat agar sampai mencapai bagian bawah. Jika tusukan menyimpang ke dinding tabung, itu dapat menyebabkan positif palsu dalam produksi gas, karena akan lepas dari saluran yang dibentuk secara keliru.

Produksi gas, serta reaksi yang terjadi di agar -agar, membutuhkan oksigen, oleh karena itu disarankan agar tabung ditutupi dengan tutup kapas, dan jika tutup Baquelite digunakan, itu tidak boleh sepenuhnya disesuaikan.

Produksi gas dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Sodium tiosulfat dan ferroum amonium sulfat (produksi hidrogen sulfida)

Bakteri yang mampu menghasilkan hidrogen sulfida (gas tidak berwarna), mengambil sulfur natrium tiosulfat hadir dalam medium. Setelah H terbentuk₂S bereaksi dengan amonium sulfat besi, menghasilkan besi sulfida (endapan hitam yang terlihat jelas).

H₂S dilaporkan sebagai positif (+) atau negatif (-).

Pada gambar yang ditemukan di awal artikel lihat gambar tabung c.

Persiapan

Beratnya 62,5 gr dari setengah -Sugar Iron Agar (TSI) didehidrasi dan larut dalam satu liter air suling.

Panas untuk membubarkan agar. Mendidihkan. Distribusikan 4 ml medium dalam tabung reaksi 13/100 dengan tutup kapas.

Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Hapus dari autoclave dan diamkan miring. Harus berhati -hati bahwa pangkalan dan bevel memiliki jarak yang sama.

Simpan di lemari es 2-8 ° C. Biarkan marah sebelum menabur regangan bakteri.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​ringan dan media yang disiapkan adalah oranye merah

PH akhir dari media yang disiapkan adalah 7,3 ± 0,2.

Aplikasi

Tes TSI banyak digunakan di tingkat laboratorium mikrobiologi. Tes ini sangat diperlukan untuk memandu jenis tes yang harus diterapkan untuk mencapai identifikasi genus dan spesies. Eksekusi dan interpretasi Anda yang baik dapat menyimpan materi dan bekerja.

Jika hasilnya adalah TSI K/KK dan uji sitokrom oksidase memberikan positif, tes harus digunakan untuk identifikasi basil gram negatif non -fermentasi, seperti pseudomonas, alkali, achromobacter, Burkholderia, di antara genre lainnya. Jika oksidase negatif, berorientasi pada asinetobacter, stenotrophomonas, dll.

Itu dapat melayani Anda: Totipotentiality: Sejarah, Karakteristik dan Pentingnya

Di sisi lain, jika A/A atau K/A TSI diperoleh dan uji sitokrom oksidase negatif, mereka mengurangi nitrat menjadi nitrit, kami akan yakin bahwa itu adalah mikroorganisme yang termasuk dalam keluarga enterobakteriace enterobactersiace FamilyaceaceaceaceaceCeace. Dalam hal ini, rute identifikasi akan berorientasi pada tes spesifik untuk kelompok bakteri ini.

Di sisi lain, jika gambar K/A atau A/A diperoleh dan uji sitokrom oksidase positif, tes tambahan akan diarahkan ke identifikasi strain fermentasi yang bukan milik keluarga Enterobacteriaceae, seperti: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio dan Pasteurella.

TSI dengan hidrogen sulfida, oksidase negatif, akan memandu genre berikut dari keluarga Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella atau Salmonella.

TSI dengan hidrogen sulfida yang langka atau sedang dalam bezel alkali dengan latar belakang alkali dan oksidase positif, akan memandu tes untuk identifikasi non -fermenting gram basil negatif produsen H dari H dari H H H H₂S, as Shewanella Putrefaciens.

Akhirnya, TSI dapat digunakan untuk penyelidikan produksi hidrogen sulfida dalam basil gram positif, terutama ketika diduga dari Erysipelothrix rhusiopathiae.

Ditabur

Media TSI harus diinokulasi dengan koloni murni, diisolasi dalam tanaman primer atau selektif. Jika koloni diambil dari cara selektif yang ditaburkan dengan sampel dengan flora campuran, perawatan harus diambil hanya dari permukaan, karena di bagian bawah koloni mungkin ada strain yang layak dihambat dalam medium itu.

Oleh karena itu, pegangan tidak boleh dingin dalam media selektif dan kemudian mengambil koloni dan menginokulasi media TSI.

Yang ditabur akan dilakukan dengan lurus atau jarum. Tusukan akan dilakukan, berhati -hati bahwa itu adalah melalui tengah tengah sampai mencapai bagian bawah, dan kemudian ditanam selesai menginokulasi permukaan berbentuk zig -zag. Jangan membuat dua tusukan.

Inkubasi pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis selama 18-24 jam. Menafsirkan saat ini, baik sebelum, maupun setelahnya.

Batasan

Tes TSI harus dibaca antara 18 hingga 24 jam inkubasi. Bacaan sebelum waktu ini dapat memberikan fermentasi palsu a/a. Sementara, bacaan setelah waktu ini, dapat menyebabkan citra negatif palsu dari non -fermenter, karena konsumsi pepton yang alkalisasi medium.

Referensi

1. Laboratorium Britania. TSI Agar (rangkap Sugar Iron Agar). 2015. Tersedia di: Britanialab.com
2. Laboratorium BD. Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar). 2003. Tersedia di: BD.com