Kaldu urea apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Kaldu urea Ini adalah media kultur cair, digunakan untuk menunjukkan keberadaan enzim ureasa pada mikroorganisme tertentu. Ureasa adalah enzim mikroba yang terjadi dengan cara konstitutif, yaitu, itu disintesis terlepas dari atau tidak dengan menjadi substrat yang bertindaknya.

Fungsi ureasa terkait dengan dekomposisi senyawa organik. Tidak semua mikroorganisme mampu mensintesis enzim ini, oleh karena itu tekadnya di laboratorium memungkinkan Anda untuk mengidentifikasi strain bakteri tertentu dan bahkan membedakan antara spesies dari jenis kelamin yang sama.

Ada dua jenis tes urea: Stuart dan Christensen. Mereka berbeda dalam komposisi dan sensitivitas mereka. Yang pertama adalah khusus untuk menunjukkan sejumlah besar ureasa yang diproduksi oleh spesies genus protein.

Yang kedua lebih sensitif dan dapat mendeteksi sejumlah kecil ureasa akhir -akhir ini oleh genre bakteri lainnya, seperti klebsiella, enterobacter, staphylococcus, brucella, bordetella, bacillus, micrococcus, helicobacter dan mycobacterium.

Kaldu urea Stuart terdiri dari urea, natrium klorida, dipotassium fosfat.

Sementara kaldu Christensen atau cengkeraman urea terdiri dari peptonas, natrium klorida, monopotásic fosfat, glukosa, urea, fenol merah, air suling dan agar-gut-gut. Yang terakhir hanya jika itu adalah media padat.

Dasar

Enzim ureasa menghidrolisis urea untuk membentuk anhidrida karbonik, air dan dua molekul amonia. Senyawa ini bereaksi untuk membentuk produk akhir yang disebut amonium karbonat.

Kaldu urea de stuart

Kaldu urea Stuart lebih buffered dengan pH 6,8. Oleh karena itu, mikroorganisme harus dapat membentuk amonium dalam jumlah besar untuk mengubah merah fenol. PH harus naik di atas 8.

Oleh karena itu, kaldu urea Stuart selektif untuk spesies proteus, memberikan hasil positif dalam 24 hingga 48 jam inkubasi, dan tidak efektif untuk bakteri yang menghasilkan beberapa jumlah ureasa atau yang perlahan menghidrolisis urea.

Ini karena spesies Proteus dapat menggunakan urea sebagai sumber nitrogen. Di sisi lain, bakteri penghasil ureasa lain membutuhkan sumber tambahan.

Itu dapat melayani Anda: Dehidrogenase Suksinat: Struktur, Fungsi, Regulasi, Penyakit

Namun, Pérez et al. (2002) menetapkan bahwa kaldu urea Stuart sama seefisiennya agar Urea Agar Christensen, untuk menentukan ureasa dalam strain ragi yang candid.

Penulis penelitian mengklaim telah mencapai 100% kebetulan dengan kedua media (Stuart dan Christensen) dengan menginkubasi selama 24 dan 48 jam; membuat pengecualian bahwa strain yang berhasil mengubah media menjadi warna pink-fucsia yang kuat dianggap positif.

Penjelasan ini diperlukan, karena Lodder (1970) mengatakan bahwa hampir semua ragi berhasil menempatkan bezel urea de christensen urea ke rosado pucat. Ini karena mereka dapat menghidrolisis urea dalam jumlah minimal, dan untuk pembentukan amina dengan dekarboksilasi oksidatif asam amino permukaan. Ini tidak boleh diartikan sebagai positif.

Kaldu atau agar urea Christensen

Kaldu atau agar urea Christensen kurang buffered, mampu mendeteksi sedikit amonium. Selain itu, media ini diperkaya dengan peptonas dan glukosa. Senyawa -senyawa ini membuat mikroorganisme penghasil ureasa lain yang tidak tumbuh di kaldu stuart berkembang.

Demikian juga, uji urea Christensen menawarkan hasil yang lebih cepat, terutama untuk Proteus, mampu memberikan sangat positif hanya dalam 30 menit sebagai waktu minimum dan hingga 6 jam sebagai waktu maksimum.

Sisa mikroorganisme yang menghasilkan Ureasa berhasil mengubah warna lingkungan sedikit setelah 6 jam, dan sangat setelah 24, 48, 72 jam atau lebih, dan bahkan beberapa strain dapat memberikan reaksi yang lemah setelah 5 atau 6 hari.

Interpretasi kedua media (Stuart dan Christensen)

Media awalnya berwarna kuning-oranye dan reaksi positif akan mengubah warna dari medium menjadi pink-fucsia. Intensitas warna berbanding lurus dengan jumlah amonium yang diproduksi.

Reaksi negatif akan meninggalkan warna asli kecuali untuk ragi, yang dapat memberikan pink pucat dengan medium urea Christensen.

Persiapan

Kaldu urea de stuart

Menimbang gram yang diperlukan sesuai dengan indikasi rumah komersial. Larut dalam air suling steril lebih disukai.  Jangan gunakan panas untuk larut, karena urea sensitif terhadap panas.

Dapat melayani Anda: monosakarida

Untuk mensterilkan metode filtrasi membran digunakan. Untuk ini, filter Millipor digunakan dengan pori -pori berdiameter 0,45 μ. Jangan gunakan autoclave. Setelah solusinya disaring, didistribusikan dalam tabung steril. Untuk mendapatkan hasil yang dapat diandalkan, antara 1,5 mL harus ditransfer sebagai jumlah minimum pada 3 mL sebagai jumlah maksimum per tabung.

Simpan di lemari es dan amarah sebelum menggunakan.

Jika metode filtrasi tidak tersedia, media harus segera digunakan untuk mendapatkan hasil yang dapat diandalkan.

Cara lain untuk menyiapkan kaldu urea Stuart adalah sebagai berikut:

Beberapa rumah komersial menjual media dasar untuk tes urea, tidak termasuk urea.

Jumlah yang ditunjukkan oleh rumah komersial sedang menimbang. Itu larut dalam air suling dan disterilkan dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Biarkan sedikit dan ketika mediumnya hangat 100 mL dari larutan urea 20% yang disiapkan dan penyaringan dengan filtrasi ditambahkan.

Ini didistribusikan dalam tabung steril, seperti dijelaskan di atas.

Kaldu atau agar urea Christensen

-Persiapan solusi urea

Berat 29 gr dari urea dehidrasi dan larut dalam 100 ml air suling. Gunakan metode filtrasi untuk mensterilkan. Tidak autoklavasi.

-Agar dasar urea

Larutkan 24 gr dari dasar dehidrasi dalam 950 mL air suling. Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Biarkan berdiri sampai mencapai suhu 50 ° C dan tambahkan urea yang sebelumnya disiapkan dengan cara aseptik.

Tuang 4 hingga 5 mL ke dalam tabung steril dan miring sampai mereka mengeras. Puncak seruling panjang harus.

Media ini juga dapat disiapkan dalam bentuk cair.

Aplikasi

Tes urea sangat efektif untuk membedakan genre proteus dari genre lain dari keluarga Enterobacteriaceae, mengingat reaksi cepat yang diberikan Proteus.

Jika komposisi Christensen digunakan, tes ini membantu membedakan antara spesies dari genus yang sama. Misalnya, S. Haemolyticus dan s. WARNERI SPADA Staphylococcus koagulase negatif dan barahemolytic, Tapi mereka berbeda dalam apa S. Haemolyticus Itu negatif dan S. Warneri Itu adalah urea yang positif.

Dapat melayani Anda: sistem saraf yang menarik

Di sisi lain, McNulty berhasil menggunakan 2% kaldu urea Christensen untuk mempelajari kehadiran Helicobacter pylori Dalam biopsi sampel yang diambil dari mukosa lambung (wilayah antral).

Kehadiran dari H. Pylori Itu dibuktikan dengan tes urea positif. Durasi untuk mengamati hasilnya berbanding lurus dengan jumlah mikroorganisme yang ada.

Seperti yang dapat dilihat, ini adalah metode sederhana untuk diagnosis Helicobacter pylori Dalam biopsi lambung.

Akhirnya, tes ini juga berguna untuk membedakan spesies dari genre brucella, bordetella, bacillus, micrococcus dan mycobacteria.

Tes urea ditaburkan

Kedua metode ini membutuhkan inokulum mikroba yang kuat untuk mengoptimalkan hasilnya. Koloni bakteri lebih disukai diambil dari agar darah dan ragi agar Sabouraud, kecuali untuk beberapa pengecualian. Inokulum diemulsi di lingkungan cair.

Untuk kaldu urea Stuart, 37 ºC diinkubasi selama 24 hingga 48 jam, mengetahui bahwa itu hanya mencari strain genus protein ketika strain adalah bakteri. Untuk ragi, Anda dapat menginkubasi pada suhu 37 ° C atau pada suhu kamar selama 24 hingga 48 jam inkubasi.

Dalam kasus kaldu urea Christensen, 37 ºC diinkubasi selama 24 jam. Jika tesnya negatif, itu dapat diinkubasi hingga 6 hari. Jika tes memberikan positif sebelum jam 6 pagi, ini menunjukkan bahwa itu adalah strain dari genre protein.

Dalam kasus agar urea Christensen, bezel agar -agar sangat diinokulasi, tanpa tusukan. Kaldu incuba dan ditafsirkan dengan cara yang sama.

Qa

Untuk menguji media, Anda dapat menggunakan kontrol kontrol, seperti Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 dan Salmonella typhimurium.  Dua yang pertama harus memberikan hasil positif dan dua hasil negatif terakhir.

Referensi

1. Laboratorium Britania. Christensen Media (Urea Base Agar). Tersedia di: Britanialab.com