Fondasi fosfat buffer (PBS), persiapan dan penggunaan

Dia buffer fosfat, bps atau buffer fosfat saline Ini adalah solusi buffer dan isotonik, yang fungsinya adalah mempertahankan tekanan pH dan osmotik yang paling dekat dengan lingkungan lingkungan alami (fisiologis). Akronim PBS berarti saline buffered fosfat.

PH dan osmolaritas adalah dua aspek yang sangat penting yang harus dikontrol dalam protokol laboratorium tertentu. Dalam kasus pH, sangat penting dikendalikan, terutama dalam reaksi biokimia, karena ini dapat bervariasi atau tidak dieksekusi jika reaktan berada dalam pH yang tidak tepat.

Penyangga salino pbs fosfat dalam dua pH berbeda. Sumber: Pixinio.com

Sementara, kontrol osmolaritas sangat penting terutama ketika bekerja dengan sel hidup, karena membran plasma sel bereaksi sesuai dengan konsentrasi zat terlarut di mana mereka ditemukan.

Jika sel -sel ditransfer ke media hipertonik, mereka akan mengalami dehidrasi, karena gradien air akan diangkut ke sisi di mana ada konsentrasi zat terlarut yang lebih besar. Jika, sebaliknya, sel ditempatkan dalam media hipotonik, sel akan menyerap cairan sampai tergeletak.

Itulah sebabnya buffer PBS untuk protokol laboratorium yang memerlukan pemeliharaan sel digunakan In vitro, Dengan cara ini sel tidak akan rusak.

PBS terdiri dari kombinasi garam, seperti natrium klorida, natrium fosfat, kalium klorida dan kalium fosfat. Komposisi PBS dapat bervariasi tergantung pada protokol.

[TOC]

Dasar

Pada dasarnya fungsi buffer fosfat saline adalah mempertahankan pH fisiologis konstan di sebelah konsentrasi elektrolitik yang mirip dengan yang ada di dalam organisme.

Dalam lingkungan ini sel -sel dapat tetap stabil, karena kondisi fisiologis mensimulasikan sebanyak mungkin.

Ke formulasi PBS asli senyawa lain yang diperlukan dapat ditambahkan, misalnya penambahan EDTA ke buffer berguna untuk pencucian sel darah merah dalam tes ketidakcocokan silang.

EDTA mencegah fraksi C1 komplemen yang ada dalam serum, untuk membagi dan lise ke sel darah merah, yaitu, menghindari hasil yang salah dari ketidakcocokan. Selain itu, EDTA membantu memisahkan sel.

Dapat melayani Anda: pohon filogenetik: jenis dan karakteristiknya, contohnya

Persiapan

Jumlah garam yang harus ditimbang untuk elaborasi PBS fosfat saline akan tergantung pada jumlah yang diperlukan untuk menyiapkan:

-Solusi Solusi Buffer Salino Phfosphate (PBS 10X)

Untuk satu liter solusi:

Menimbang:

80,6 g NaCl,

2.2 g KCL,

11,5 g dari Na₂HPO₄,

2.0 g KH₂HPO₄

Teknik persiapan

Di gelas gelas letakkan garam tebal, tambahkan air yang cukup (80%) dan campur pada pelat pengaduk dengan batang magnetik sampai garam larut.

Persiapan PBS Menggunakan Besi Agitasi dengan Batang Magnetik . Sumber: Pengguna: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filter untuk menghilangkan partikel yang tidak ditinggalkan. Gunakan filter dengan pori 0,45 μm. Sterilice autoclave dan mendistribusikan secara aseptik pada lonceng aliran laminar dalam stoples kaca dengan tutupnya.

Ke larutan 10x (terkonsentrasi) tidak menyesuaikan pH. Penyesuaian dilakukan setelah diencerkan ke konsentrasi buffer PBS 1X, (pengenceran 1:10).

-Saline Phosphate Buffer (PBS 1X)

PBS 1X dapat disiapkan secara langsung, menimbang jumlah yang sesuai dari setiap garam atau dapat menyiapkan melencengkan larutan ibu (1:10) dengan air suling steril.

-Untuk secara langsung mempersiapkan satu liter saline fosfat PBS 1x menyesal:

8.06 g NaCl,

0,22 g KCL,

1.15 g na₂HPO₄,

0,20 g KH₂HPO₄

Teknik persiapan

Lanjutkan seperti yang dijelaskan dalam larutan terkonsentrasi. Selanjutnya pH harus disesuaikan. Untuk melakukan ini, ukur pH dan tergantung pada hasil penggunaan asam (HCl) atau basa (NaOH) untuk menurunkan atau mengunggah pH masing -masing sebagaimana diperlukan, sampai 7.4.

Asam atau basa ditambahkan drop demi drop saat memantau nilai pH larutan menggunakan pH-meter. Saring, sterilice autoclave dan mendistribusikan secara aseptik dalam tabung atau botol kerucut yang diperlukan.

-Untuk menyiapkan PBS 1X dari solusi ibu 10x:

Membuat pengenceran 1:10. Misalnya, untuk menyiapkan 1 liter PBS 1X, ukur 100 mL larutan ibu dan tambahkan 700 mL air suling steril. Sesuaikan pH dan lengkapi jumlah air sampai mencapai 1000 ml.

Dapat melayani Anda: seleksi terarah: apa itu, definisi, contoh

Buffer PBS yang disiapkan tidak berwarna dan transparan.

Penggunaan harian PBS dapat disimpan pada suhu kamar dan sisanya di lemari es.

.Solusi untuk Pengaturan PH

Hcl

Untuk 100 mL HCl (asam hidroklorat) hingga 1 molar.

Ukur 91 ml air suling dan letakkan di dalam kapal endapan dengan kapasitas 250 mL.

Ukur 8,62 mL HCl pekat dan perlahan -lahan tambahkan ke gelas kimia yang mengandung air (tidak pernah terbalik). Ambil langkah -langkah biosekuriti yang relevan saat menangani asam yang kuat (zat yang sangat korosif).

Campur selama 5 menit menggunakan pelat pengaduk dengan batang magnetik di dalam kaca. Pergi ke bola 100 ml dan siram pada 100 mL dengan h₂Atau disuling.

Naoh

Untuk 100 mL NaOH (natrium hidroksida) 10 molar.

Ukur 40 ml air suling dan letakkan di gelas kapasitas 250 mL. Ukur 40 gr naOH dan tambahkan ke air. Campur menggunakan pelat pengaduk dengan batang magnetik di dalam kaca.

Buka bola aggroid 100 mL dan siram dengan air suling. Mematuhi standar biosafety, karena reaksi ini eksotermik (melepaskan energi dalam bentuk panas).

Jika Anda ingin menyiapkan larutan fosfat saline dalam jumlah lainnya, Anda dapat berkonsultasi dengan tabel berikut:

Sumber: "Laboratorium Genomik Viral dan Manusia, Sekolah Kedokteran UASLP"

Aplikasi

Terutama digunakan di laboratorium biologi sel, imunologi, imunohistokimia, bakteriologi, virologi dan penelitian.

Sangat ideal untuk membuat pencucian seluler dengan sentrifugasi (sel darah merah), sel monokapas dicuci, dalam teknik ellipsometry spektroskopi, dalam kuantifikasi biofilm bakteri, dalam pemeliharaan tanaman sel untuk virus, sebagai larutan pencucian dalam teknik tidak langsung imunofluoresensi dan teknik untuk karakterisasi antibodi monoklonal.

Ini juga berfungsi untuk mengangkut sel atau jaringan, sebagai pengencer untuk penghitungan sel, persiapan enzim sel (tripsin), sebagai pengencer dari metode pengeringan biomolekul dan untuk menyiapkan reagen lainnya.

Dapat melayani Anda: nutrisi heterotrof: karakteristik, tahapan, jenis, contoh

Di sisi lain, Martin dan kolaborator pada tahun 2006 menunjukkan bahwa PBS berguna di laboratorium sains forensik, khususnya dalam pemulihan sperma dari noda vagina, atau dalam pemulihan sel -sel vagina penis yang dioleskan. Dengan cara ini dapat ditetapkan jika ada hubungan seksual.

Batasan

-Beberapa penyangga PBS membawa bahan pengawet yang disebut natrium azid. Senyawa ini dapat menghasilkan zat peledak jika bersentuhan dengan timbal atau tembaga. Untuk alasan ini, perawatan khusus harus diambil saat membuang reagen ini untuk drainase. Jika dibuang dengan rute ini, air yang berlimpah harus ditambahkan untuk mengencerkan secara maksimal.

-Buffer fosfat tidak boleh ditambahkan seng, karena memicu beberapa garam.

-Wangen dan kolaborator pada tahun 2018 menentukan bahwa penggunaan PBS tidak cocok untuk pencucian leukemia myeloid akut primer (AML) yang diekstraksi dari darah perifer, karena banyak sel yang hilang oleh lisis, dengan penurunan besar dalam bahan protein yang besar dalam bahan protein besar.

Oleh karena itu, mereka menentukan bahwa sel primer AML tidak boleh dicuci dengan PBS setelah penyimpanan dalam nitrogen cair.

Referensi

1. Coll J. (1993). Teknik diagnostik dalam virologi. Ed Díaz de Santos. 360 hal
2. Rodríguez M, Ortiz T. Budaya sel. Perubahan Medium. Departemen Histologi Normal dan Patologis Universitas Seville. Tersedia dalam personel.kita.adalah
3. Persiapan Saline Buffered Fosfat (PBS). (2008). Prosedur Operasi Standar (SOPS) Viral dan Human Genomics Laboratory Fakultas Kedokteran UASLP. Tersedia di: Genomik.UASLP.MX
4. "Penggemar fosfat saline." Wikipedia, ensiklopedia gratis. Apr 2019, 19:36 UTC. Apr 2019, 02:57 adalah.Wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, von-bilderling C.Topik dalam Biofisika Molekuler. Tersedia di: Pengguna.Df.UBA.ar
6. Rediar. Manual. PBS+EDTA. Tersedia di: Felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Penggunaan saline buffered fosfat untuk pemulihan sel dan spermatozoa dari swabs. Keadilan sci. 2006; 46 (3): 179-84. Tersedia di: NCBI.Nlm.Nih.Pemerintah
8. Wangen R, Aasebø E, Treeni A, et al. Metode pelestarian dan pencucian fosfat buffered saline sesuai dengan proteome leukemia myeloid akut. Int j mol sci. 2018; 19 (1): 296. Tersedia di: NCBI.Nlm.Nih.Pemerintah
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Dasar teoretis dan praktis histokimia. Dewan Superior Investigasi Ilmiah. Madrid. Tersedia di: Buku.Google.bersama.pergi