EC Breatment, Persiapan dan Penggunaan

Dia Kaldu EC atau kaldu Escherichia coli Ini adalah media kultur cair selektif. Media ini direkomendasikan oleh metode standar untuk jumlah total dan coliform tinja, dengan teknik angka yang paling mungkin (NMP) dalam sampel air dan makanan, di mana agen utama yang terlibat adalah Escherichia coli.

Kaldu EC terdiri dari tripteine, laktosa, garam empedu, pipotasic fosfat, monopotasik fosfat, natrium klorida dan air. Formulanya dirancang secara strategis untuk mendukung pertumbuhan coliform total dan tinja dan mencegah pengembangan mikroorganisme lain yang menyertainya.

Representasi figuratif dari persiapan kaldu EC. Sumber: Pixabay.com

Bakteri Escherichia coli Ini adalah coliform tinja utama sebagai polutan dalam sumber air dan makanan, menjadi penyebab efek pencernaan yang penting.

Perlu dicatat bahwa ada banyak serotipe Escherchia coli; Di antara mereka, enterohemorrágica (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopatogenik (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) dan enteroagregatif (EAEC) dapat disebutkan.

Media ini memiliki kemampuan untuk memungkinkan pengembangan semuanya, tetapi tidak dapat membedakan mereka dari satu sama lain. Untuk ini, tes tambahan harus dilakukan.

Studi mikrobiologis air dan makanan untuk angka yang paling mungkin (NMP) untuk pencarian coliform total dan tinja adalah protokol yang terdiri dari beberapa fase; fase dugaan, fase konfirmasi dan fase penyelesaian. Kaldu EC digunakan dalam fase konfirmasi.

[TOC]

Dasar

Kaldu EC

Media EC didasarkan pada penyediaan elemen nutrisi yang diperlukan untuk pengembangan optimal total dan coliform fecal, di mana bakteri disertakan Escherichia coli.

Elemen nutrisi ini disediakan oleh Triptein, menjadi sumber peptida dan asam amino yang sangat baik. Selain itu, ini juga mengandung laktosa, karbohidrat yang dapat difermentasi yang menyediakan energi dan memungkinkan Anda untuk menunjukkan jika bakteri menghasilkan gas.

Di sisi lain, media mengandung garam empedu yang memberikan sifat selektif, karena menghambat pertumbuhan mikroorganisme positif gram yang mungkin ada dalam sampel.

Itu bisa melayani Anda: flora dan fauna dari nuevo león

Demikian juga, fosfat dipotasy. Sistem ini diperlukan, karena laktosa yang terkandung dalam kaldu cenderung mengasamkan media ketika difermentasi oleh mikroorganisme, tetapi ini dikompensasi oleh garam fosfat.

Oleh karena itu, elemen -elemen ini sangat penting, karena keasaman tanpa kontrol dapat mempengaruhi perkembangan yang baik dari mikroorganisme yang dicari.

Untuk bagiannya, natrium klorida menstabilkan lingkungan, sedangkan air adalah pelarut zat terlarut yang ada dan memberikan konsistensi cairan terhadap lingkungan.

Kaldu EC dimodifikasi dengan novobiocin

Okrend dan Rose menciptakan berbagai kaldu EC, yang disebut kaldu EC yang dimodifikasi EC. Modifikasi terdiri dari penurunan konsentrasi garam empedu dan agregat 20 mg/dl novobiocina.

Modifikasi ini mendukung pemulihan strain Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Serotipe bakteri ini menyebabkan kolitis hemoragik parah yang dapat menyebabkan sindrom uremik hemolitik (SUH); yang pada gilirannya dapat menghasilkan gagal ginjal akut, dengan tingkat kematian yang tinggi yang dapat mencapai hingga 50% pada orang tua.

Karena yang disebabkan oleh bakteri ini untuk konsumsi makanan yang terkontaminasi, Departemen Pertanian Amerika Serikat (USDA) sangat merekomendasikan penggunaan media ini.

Persiapan

Kaldu EC

Beratnya 37,4 gr dari medium dehidrasi dan larut dalam 1 liter air suling. Campuran harus diizinkan selama 5 menit. Selanjutnya, dalam sumber panas, akhirnya sering melarutkan melambai.

Setelah dibubarkan, didistribusikan dalam tabung reaksi yang sebelumnya dikondisikan dengan tabung durham di dalamnya. Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Dapat melayani Anda: sphingomyeline: apa itu, struktur, fungsi, sintesis

PH medium harus 6,9 ± 0,2.  Warna media dehidrasi adalah krem ​​dan disiapkan adalah kuning jernih.

Kaldu disimpan di lemari es sampai digunakan. Pada saat penggunaan kaldu harus pada suhu kamar.

Di sisi lain, kaldu EC juga dapat disiapkan dalam konsentrasi ganda.

Kaldu EC dimodifikasi dengan novobiocin

Beratnya 36,7 gr dari media dehidrasi dan larut dalam 1 liter air. Sisa persiapan sama dengan yang dijelaskan di atas.

Menggunakan

Analisis Total dan Coliform Fecal

Kaldu EC sangat ideal untuk fase konfirmasi studi coliform dengan metode NMP, keduanya dalam sampel air, seperti pada produk farmasi dan makanan.

Kaldu produksi yang lebih ketat dan gas yang diperoleh dalam fase dugaan harus dipulihkan dalam kaldu hijau cerah pada 2% dan dalam kaldu EC.

Untuk total coliforms, kaldu EC diinkubasi dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C, dan untuk coliform tinja mereka diinkubasi dalam aerobiosis selama 24 hingga 48 jam pada 44 ° C.

Dalam kedua kasus ini ditafsirkan sebagai berikut: tabung keruh dengan produksi gas dianggap positif. Jika dalam 24 jam tidak ada produksi gas yang melanjutkan inkubasi hingga 48 jam.

Kaldu EC positif pergi ke fase konfirmasi lengkap, yang terdiri dari hadiah di media selektif seperti Mac Conkey, EMB atau Endo Endo Agar.

Jika kaldu yang digunakan dimodifikasi dengan novobiocin, tabung positif disarankan menyerupai mac conkey agar dengan sorbitol.

Qa

Kontrol kualitas harus dilakukan dari setiap batch sedang yang disiapkan. Pertama -tama, sterilitas lingkungan harus. Dalam hal ini, satu atau dua kaldu tanpa inokulasi dalam aerobiosis selama 24 jam pada suhu 37 ° C diinkubasi. Hasil yang diharapkan adalah kaldu transparan, tanpa kekeruhan atau perubahan warna.

Dapat melayani Anda: kompetensi interspesifik: karakteristik dan contoh

Kedua, pertumbuhan strain yang diketahui harus dievaluasi, untuk ini Anda dapat menggunakan bakteri berikut: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dalam semua kasus, perkembangan mikroba yang memuaskan diharapkan, mengamati kaldu mendung dengan produksi gas untuk DAN. coli dan tanpa gas untuk salmonella.

Strain lain yang dapat dimasukkan dalam kontrol adalah: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Strain ini harus benar -benar terhambat.

Rekomendasi

-Penempatan tabung Durham sangat diperlukan untuk studi coliform.

-Mendistribusikan medium dalam tabung reaksi sebelum sterilisasi, tidak pernah setelahnya.

-Jangan gunakan jika media telah disiapkan lebih dari 3 bulan.

-Jangan gunakan jika ada perubahan karakteristik media yang biasa diamati.

Referensi

1. Laboratorium Britania. EC Tengah. 2015. Tersedia di: Britanialab.com
2. DAN. coli Enterohemorrhagic. Pusat Keamanan Pangan dan Kesehatan Masyarakat. 2010. Tersedia di: CFSPH.iastate.Edu
3. Corporation Neogen. EC sedang. Tersedia di: Foodsafety.Neogen.com
4. Neogen. EC yang dimediasi dimodifikasi dengan novobiocina. Tersedia di: Foodsafety.Neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, oleh Castillo M. Deteksi, isolasi dan karakterisasi Escherichia coli Produsen racun shiga dari daging giling segar dari tukang daging Concepción, provinsi Tucumán. Rev Arg of Microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  Tersedia di: www.Scielo.org.