Yayasan Tioglicolate Broth, Persiapan dan Penggunaan

Dia Kaldu tioglikolat Itu adalah sarana konsistensi cairan yang diperkaya. Itu dikenal dengan akronim FTM). Itu dibuat oleh pembuat bir dan dimodifikasi pada tahun 1944 oleh Vera, yang memasukkannya peptone casein.

Media ini memiliki potensi oksidasi rendah, sehingga tidak dianjurkan untuk pengembangan bakteri aerobik yang ketat, tetapi sangat ideal untuk memulihkan bakteri aerobik opsional, bakteri anaerob mikroaerofilik yang ketat dan mikroaerofilik,.

Kaldu tioglikolat tanpa indikator. Sampel sekresi vagina. Sumber: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/4.0)]

Kinerja tinggi yang diamati dengan media ini dalam isolasi dan pemulihan beragam mikroorganisme, telah membuatnya diterima oleh Amerika Serikat Pharmacopoeia (USP), oleh Asosiasi Resmi Kimiawan Pertanian (AOAC) dan oleh European Pharmacopoeia (EP).

Organisasi -organisasi ini merekomendasikan TI untuk tes kontrol sterilitas produk farmasi dan untuk pengayaan berbagai jenis sampel.

Cado tioglikolat terdiri dari ekstrak ragi, kasein digreas, dekstrosa anhidrat, L-sistin, natrium klorida, natrium tioglikolat, istirahat dan puncak dalam jumlah kecil dalam jumlah kecil.

Ada beberapa versi dari media ini, di antaranya adalah: kaldu tioglikolat dengan indikator, kaldu tioglikolat tanpa indikator, kaldu tioglikolat dengan indikator yang lebih besar dengan hemine dan vitamin K_1, Dan kaldu tioglikolat dengan karbonat kalsical.

It should be noted that the variant of tioglycate broth enriched with hemine and vitamin K serves to improve the growth of demanding strict anaerobes, and the variant of tioglycolate broth that contains calcium carbonate is useful to counteract the acids produced during microbial growth.

[TOC]

Dasar

Tioglycolate Broth dianggap sebagai pengayaan, tidak selektif karena memungkinkan pengembangan sebagian besar bakteri yang tidak menuntut. Persyaratan gizi disediakan oleh ekstrak ragi, pankreas dicerna dan glukosa.

Di sisi lain, media ini meskipun kaldu mengandung sejumlah kecil agar; Ini menyebabkan potensi reduksi oksida rendah, karena rem masuk oksigen, sehingga oksigen menurun saat semakin dalam di dalam tabung.

Itulah sebabnya media ini sangat ideal untuk pengembangan bakteri aerobik opsional, mikroaerofil dan anaerob yang ketat, 2 yang terakhir tanpa menginkubasi dalam kondisi ini. Media yang sama mengatur jumlah oksigen di dalam lingkungan, tidak ada di bagian bawah tabung dan dalam jumlah yang cukup di permukaan.

Dapat melayani Anda: fenilalanin: karakteristik, fungsi, biosintesis, makanan

Demikian juga, tioglikolat dan L-sistin bertindak sebagai agen pereduksi, berkontribusi pada pencegahan akumulasi zat yang berbahaya bagi perkembangan bakteri, seperti peroksida. Selain itu, senyawa-senyawa ini mengandung kelompok sulfidril (-sh-), menetralkan efek penghambatan dari turunan mercurial, arsenik, di antara logam berat lainnya.

Di sisi lain, kegelisahan adalah indikator reduksi oksida. Zat ini tidak berwarna saat dikurangi dan merah muda saat teroksidasi. Ada varian kaldu tioglikolat dengan indikator dan tanpa indikator. Penggunaannya akan tergantung pada jenis sampel dan preferensi laboratorium.

Sementara itu, natrium klorida mempertahankan keseimbangan osmotik kaldu tioglikan dan penggunaan glukosa anhidra mencegah kelembaban berlebih di lingkungan dehidrasi.

Persiapan

Kaldu tioglikolat dengan indikator

Berat 29,75 gr dari media dehidrasi dan larut dalam 1 liter air suling. Campuran dibiarkan sekitar 5 menit. Bawa sumber panas dan aduk sesering itu sampai larut sepenuhnya.

Tuang medium ke dalam tabung reaksi dan autoklavasi pada 121 ° C selama 15 menit. Biarkan dingin sebelum digunakan. Periksa sisipan rumah komersial untuk konservasinya. Beberapa merekomendasikan menabung pada suhu kamar di tempat gelap, dan yang lain di lemari es yang dilindungi dari cahaya.

PH medium yang disiapkan adalah 7,1 ± 0,2.

Warna medium dehidrasi ringan dan disiapkan krem ​​adalah kuning jernih dengan beberapa opalescence.

Kaldu tioglikolat dengan indikator hemin dan vitamin K₁

Ada media komersial yang sudah membawa hemina dan vitamin K₁, Khusus untuk budidaya anaerobik.

Jika Anda tidak memiliki media yang diperkaya untuk anaerob, kaldu tioglikat dasar dapat disiapkan. Untuk melakukan ini, 10 mg hemine hidroklorida dan 1 mg vitamin K ditambahkan₁ Untuk setiap liter media. Namun, jika darah atau serum ditambahkan ke kaldu tioglikolat, penambahan hemine, vitamin K tidak perlu.

Dapat melayani Anda: kompetisi intra -spesifik: karakteristik, jenis dan contoh

Kaldu tioglikolat dengan kalsium karbonat

Datang secara komersial dan bersiap mengikuti instruksi dari sisipan.

Kaldu tioglikolat tanpa indikator

Ini memiliki komposisi yang sama dari tioglisat dasar, tetapi tidak mengandung resazurine.

Beratnya 30 gr dari media dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Sisa persiapan sama dengan yang dijelaskan dalam kaldu tioglikat dengan indikator.

Menggunakan

Kaldu tioglikolasi berguna untuk pengayaan sampel klinis, terutama bagi mereka yang berasal dari situs steril. Ini juga berguna untuk sampel non -klinis, seperti kosmetik, obat, dll.

Untuk inokulasi sampel cairan (seperti CSF, cairan sinovial, antara lain), sampel pertama kali disentrifugasi dan kemudian 2 tetes sedimen diambil dan ditempatkan dalam kaldu tioglikolat. Inkubasi pada suhu 35 ° C selama 24 jam. Jika saat ini tidak ada pertumbuhan (kekeruhan), itu diinkubasi hingga maksimal 7 hari.

Jika sampel diambil dengan hiopus, media kultur pertama -tama diinokulasi dalam piring dan akhirnya swab dimasukkan ke dalam kaldu, porsi yang menonjol dan tabung tertutup, meninggalkan swab di dalam. Incuba pada suhu 35 ° C selama 24 jam, maksimal 7 hari.

Untuk sampel padat, itu harus dihomogenisasi dalam larutan fisiologis saline (SSF) dan kemudian menginokulasi kaldu tioglikolat dengan 2 tetes suspensi.

Kadang -kadang dapat digunakan sebagai alat transportasi untuk sampel di mana keberadaan anaerob yang ketat atau seperti yang dicurigai oleh kaldu pengayaan cadangan.

Varian kaldu tioglikolat dengan kalsium karbonat digunakan untuk pemeliharaan kontrol untuk waktu yang lebih lama, karena memiliki kemampuan untuk menetralkan asam yang dihasilkan dengan penggunaan glukosa; Asam ini beracun bagi bakteri tertentu.

Pertumbuhan kaldu tioglikolat akan diamati karena kekeruhan lingkungan. Dianjurkan untuk melakukan pewarnaan gram dan selanjutnya subyektif di media yang tidak selektif dan selektif, tergantung pada jenis sampel dan mikroorganisme yang diduga mereka dugaan.

Qa

Untuk kontrol sterilitas disarankan untuk menginkubasi satu atau dua kaldu tanpa menginokulasi. Hasil yang diharapkan adalah kaldu transparan, tanpa perubahan warna, meskipun normal untuk sedikit warna merah muda untuk diamati pada permukaan tabung.

Itu dapat melayani Anda: padang rumput laut: apa itu, karakteristik, flora, fauna

Untuk kontrol kualitas, antara 10 - 100 UFC kontrol bersertifikat, seperti Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroids vulgatus ATCC 8482.

Inkubasi pada 30-35 ° C dalam aerobiosis selama 24 jam hingga maksimal 3 hari, karena mikroorganisme ini adalah pertumbuhan yang cepat.

Dalam semua kasus, perkembangan yang baik diharapkan, dengan pengecualian Micrococcus luteus Dan Bacillus subtilis, dimana mungkin ada pengembangan sedang.

Untuk kontrol kualitas kaldu tioglikolat yang diperkaya dengan hemina dan vitamin K₁, Strain kontrol dapat digunakan Bacteroids vulgatus  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 dan Bacteroids fragilis ATCC 25285. Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan.

Rekomendasi

-Kadang -kadang dapat dilihat bahwa permukaan kaldu tioglikat dengan indikator menjadi merah muda; Ini karena oksidasi lingkungan. Jika warna merah muda mencakup 30% atau lebih dari total kaldu dapat dipanaskan dalam penangas air selama 5 menit, mendinginkan lagi dan digunakan.

Ini akan menghilangkan oksigen yang diserap, mengembalikan medium ke warna aslinya. Prosedur ini hanya dapat dilakukan sekali.

-Untuk meningkatkan pertumbuhan bakteri aerobik, itu harus diinkubasi dengan tutup yang sedikit malas. Namun, lebih disukai untuk digunakan untuk tujuan ini, broth broth otak atau kaldu kedelai triptik untuk perkembangan yang baik dari aerob yang ketat.

-Pembekuan lingkungan atau overheating harus dihindari, karena kedua kondisi itu merusak medium.

-Lampu Langsung Membuat Medium Kultur, harus dilindungi dari cahaya.

Referensi

1. Laboratorium Britania. USP tioglycolate dengan indikator. 2015. Tersedia di: Labbritania.com.
2. Laboratorium Quos SAS. 2019. Kaldu tioglikolat. Tersedia di: Quios.com.bersama
3. BD Laboratories Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Tersedia di: BD.com/Eropa
4. BBL Media disiapkan dalam tabung untuk budidaya mikroorganisme anaerob. Media tioglisat. 2013. Tersedia di: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.