Bakteri Breaking Apa itu, karakteristik dan persiapan

Dia Bakteri noda Ini adalah ekstensi dalam bentuk film tipis suspensi mikroorganisme bakteri yang dibuat pada pelat kaca transparan atau slide, untuk pengamatan di bawah mikroskop optik.

Perpanjangan dalam bentuk film dilakukan untuk memisahkan mikroorganisme sebanyak mungkin, karena jika pengamatan dikelompokkan tidak jelas.

Dalam studi tanaman bakteri, smear, memperbaiki dan teknik persiapan pewarnaan digunakan untuk menganalisisnya dengan lebih baik. Karena ukuran mikroorganisme yang kecil, penggunaan mikroskop optik untuk pengamatan diperlukan.

Mikroskop optik adalah instrumen yang sangat diperlukan untuk pengamatan noda. Ini menggunakan lensa optik dan cahaya yang memungkinkan visualisasi sampel dengan ukuran besar.

Secara umum, sel -sel hidup tidak memiliki struktur yang sangat berwarna, pandangan mikroskop optik adalah sampel yang tidak berwarna, transparan, dan menunjukkan sangat sedikit kontras internal dan dengan lingkungannya.

Pengamatan dengan mikroskop optik sederhana dari bidang jernih, tanpa menggunakan teknik pewarnaan tambahan, sangat terbatas dan hanya digunakan dalam beberapa kasus, seperti dalam pengamatan gerakan mikroorganisme.

Untuk pengamatan mikroorganisme secara optimal, perlu untuk mencapai keseimbangan antara kontras dan resolusi. Rincian sel tidak dapat diamati pada mikroskop, bahkan dengan resolusi tinggi; Penggunaan pewarna melalui teknik pewarnaan diperlukan, yang berkontribusi kontras untuk pengamatan.

Karakteristik noda bakteri berkualitas baik

Kontras yang sangat baik

Untuk mencapai kontras yang sangat baik, ada mikroskop canggih yang disebut mikroskop kontras fase, gangguan diferensial dan mikroskop medan gelap. Jenis mikroskop ini digunakan untuk mengamati struktur bakteri seperti polong dan filamen, antara lain.

Pewarnaan adalah teknik sederhana untuk meningkatkan kontras yang dicapai dengan mikroskop lapangan yang jelas. Dalam teknik ini pewarna yang berbeda dapat digunakan yang secara signifikan meningkatkan pengamatan mikroskop.

Pewarnaan dibuat langsung pada apusan atau ekstensi suspensi mikroorganisme pada slide, yang sebelumnya dikeringkan dan diperbaiki.

Baik diperbaiki

Memperbaiki adalah teknik yang digunakan untuk melestarikan struktur seluler; menyebabkan inaktivasi mikroorganisme dan adhesi pada gelas slide. Ada perawatan perbaikan yang berbeda: fiksasi panas dan fiksasi kimia.

Dapat melayani Anda: asam palmitholeat: struktur, fungsi, di mana itu

Fiksasi panas

Ini adalah metode yang paling banyak digunakan dalam pengamatan noda bakteri. Teknik ini terdiri dari melewati suspensi bakteri apusan oleh nyala api yang lebih ringan. Teknik ini mampu mempertahankan morfologi eksternal bakteri, tetapi menghancurkan struktur internalnya.

Fiksasi Kimia

Fiksasi kimia menggunakan zat kimia dalam pelestarian, seperti formaldehida atau formalin, etanol dan asam asetat, antara lain. Keuntungan menggunakan pemasangan agen kimia adalah bahwa pelestarian struktur seluler internal mikroorganisme tercapai.

Noda darah. Sumber: Bobjgalindo [GFDL (http: // www.gnu.Org/copyleft/fdl.html) atau cc by-sa 4.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/4.0)], dari Wikimedia Commons

Pewarnaan yang bagus

Prosedur yang paling umum untuk melakukan pewarnaan dari apusan yang sebelumnya pengeringan dan tetap adalah pewarnaan positif atau sederhana, pewarnaan diferensial dan pewarnaan negatif. Ada juga teknik khusus untuk pewarnaan struktur sel tertentu (kapsul, spora, flagela).

Pewarnaan positif atau pewarnaan sederhana

Pewarnaan positif atau sederhana adalah teknik pewarnaan smear yang paling banyak digunakan. Gunakan pewarna yang memiliki kemampuan untuk bergabung dengan struktur mikroba tertentu, memungkinkan mereka untuk mengamatinya di mikroskop.

Pewarna ini memiliki kelompok kromofor (bagian berwarna) dalam struktur kimianya, dengan ikatan rangkap alternatif dan ikatan sederhana (konjugasi). Tautan ini pada gilirannya dapat menetapkan ikatan ionik atau kovalen dengan beberapa struktur seluler.

Pewarna yang digunakan dalam pewarnaan positif atau sederhana sebagian besar merupakan turunan kimia dari Anilin (Garam organik berwarna).

Di sisi lain, di antara pewarna kita dapat menemukan beberapa dengan pH dasar dan lainnya dengan pH asam.

Pewarna dasar

Dalam pewarna dasar, kelompok kromofor memiliki muatan listrik yang positif. Sebagian besar mikroorganisme prokariotik memiliki pH netral internal, dan permukaan selnya memiliki beban negatif. Melalui interaksi elektrostatik ini, kromofor mengikat sel dan pewarna.

Contoh pewarna dasar adalah metilen biru, kaca ungu, hijau malachite, sekering dasar, safranin, antara lain.

Pewarna asam

Dalam pewarna asam, kelompok kromofor memiliki muatan listrik negatif. Ini digunakan untuk pewarnaan protein dengan kelompok muatan positif. Contoh pewarna asam adalah sekering asam, mawar bengal, merah Kongo dan eosin.

Itu dapat melayani Anda: Propage: Apa itu, tipe dan karakteristiknya

Pewarnaan diferensial

Teknik pewarnaan diferensial adalah menerapkan dua pewarna dengan warna atau intensitas yang berbeda, untuk membedakan mikroskop mikroskop. Pewarnaan gram dan pewarnaan resistensi asam-alkohol adalah pewarnaan diferensial yang paling banyak digunakan dalam bakteriologi.

Pewarnaan Gram digunakan sebagai tes pendahuluan untuk mengetahui bentuk, ukuran, kelompok sel, selain jenis dinding sel. Dengan uji pewarnaan gram, bakteri dinding sel diklasifikasikan sebagai bakteri gram positif dan bakteri gram negatif.

Pewarnaan negatif

Dalam teknik ini, pewarna kimia digunakan yang tidak menembus interior seluler, tetapi membuat media di mana mikroorganisme muncul sebagai latar belakang hitam.

Dalam teknik pewarnaan negatif, apusan disiapkan dengan setetes suspensi tinta Cina atau nigrosin, yang setelah memungkinkan pengeringan pada suhu kamar membentuk film buram untuk lewatnya cahaya. Dengan cara ini, mikroorganisme diamati sebagai bentuk terang pada latar belakang yang gelap.

Persiapan

KE. Mengolesi

1.- Cuci dengan sangat baik slide, keringkan dengan kertas penyerap dan beri label. Label harus menunjukkan konten persiapan, tanggal dan nama mereka yang telah memprosesnya.

2.- Nyalakan yang lebih ringan dan mensterilkan pegangan inokulasi dalam nyala api menjadi merah hidup.

3.- Biarkan pegangannya.

4.- Ambil tabung tanaman bakteri, lepaskan tutupnya dan dengan cepat lewati mulut tabung di dekat nyala api yang lebih ringan (nyala).

5.- Masukkan pegangan inokulasi ke dalam tabung yang berisi kultur bakteri dan ambil sampel.

6.- Jika tanaman dalam cairan, tempatkan sampel yang diambil dengan pegangan di tengah slide dan memperpanjangnya dengan hati -hati dalam lingkaran berdiameter sekitar 2 cm.

7.- Mensterilkan pegangan inokulasi.

8.- Biarkan pengeringan noda di udara.

9.- Ulangi langkah dari 3 hingga 8 tiga kali.

10.- Jika tanaman dalam padatan, setetes air suling sebelumnya harus ditempatkan pada slide. Ini dilakukan untuk mencampur sampel kecil tanaman yang diambil dengan pegangan inokulasi, sesuai dengan indikasi langkah 2 hingga 5 (kondisi asepsis).

Itu dapat melayani Anda: biologi pengembangan: sejarah, studi apa, aplikasi

sebelas.- Perpanjang sampel yang diencerkan dengan setetes air pada slide dan ulangi tiga kali.

B. Fiksasi

1.- Tambahkan ke Guru Cium Kering -crop dalam media cair -Dua tetes metanol atau etanol absolut.

2.- Biarkan pengeringan udara menjauh dari yang lebih ringan.

3.- Jika noda berasal dari kultur padat, bau kering yang diperbaiki dibuat dengan panas, melewatkannya 2 hingga 3 kali cepat.

4.- Sentuh bagian bawah noda dengan bagian dorsal dari tangan kiri (untuk yang kanan; jika tidak, gunakan tangan kanan) dan verifikasi bahwa itu dingin.

C. Pewarnaan sederhana

1.- Tambahkan ke noda 2 tetes pewarna yang dipilih dan biarkan bertindak untuk waktu yang dibutuhkan dalam protokol spesifik dari setiap pewarna (biasanya antara 1 dan 5 menit).

2.- Beberapa pewarna memerlukan penggunaan panas untuk aktivasi, dalam hal ini Anda harus sangat berhati -hati saat memanaskan bagasi dalam nyala api yang lebih ringan (memanipulasi dengan pinset dan menghindari mendidih). Panas berlebih dari noda dapat menghancurkan sel yang diinginkan.

3.- Lepaskan kelebihan pencucian pewarna dengan air suling dari gambar. Hilangkan air cuci, dengan lembut mengenai slide untuk lagunya, cenderung di meja kerja.

4.- Biarkan pengeringan udara.

5.- Tergantung pada jenis pengamatan, penutup digunakan atau tidak pada tahap ini. Penutup dan melestarikan noda. Jika pengamatan penyelaman minyak dilakukan pada tahap ini, noda tidak digunakan tetapi noda tidak dapat dilestarikan.

D. Pelestarian smear definitif

1.- Menenggelamkan noda berturut -turut di masing -masing solusi yang ditunjukkan di bawah ini, selama minimal 5 menit. Tujuan dari "kamar mandi" ini adalah untuk meninggalkan apusan sepenuhnya mengalami dehidrasi. Setiap reagen harus dikeringkan dengan baik, sebelum memasuki noda di kamar mandi berikut.

Urutan pemandian dehidrasi adalah sebagai berikut:

1. 70 % etanol
2. 95 % etanol
3. Aseton murni
4. Campuran aseton -xilol 1: 1
5. Xilol

Kemudian biarkan pengeringan udara.

2.- Pasang penutup, lebih disukai 22 × 22 mm, menggunakan Balsem Kanada atau cara lain untuk perakitan.

Referensi

1. Cappucino, J.G. dan Welch, c.T. (2017). Mikrobiologi: Laboratorium Manual. Pearson.
2. Holt, J.G. Editor. (1977). Manual Bakteriologi Determinatif Bergey yang lebih pendek. 8^th Baltimore: Williams and Wilkins Co.