Foundation, Prosedur dan Penggunaan Tes Coagulase

Itu Tes koagulase Ini adalah teknik laboratorium yang digunakan untuk menyoroti keberadaan enzim koagulase. Enzim ini memiliki sifat plasma koagular. Loeb pada tahun 1903 adalah yang pertama menggambarkan enzim ini.

Tes ini dilakukan untuk gram kelapa positif, katalase positif, memungkinkan galur Staphylococcus aureus dari sisa staphylococci, karena ia adalah satu -satunya mikroorganisme yang memiliki kepentingan klinis yang memproduksinya.

Kedua gambar mengungkapkan tes koagulase positif. Sumber: Gambar Kiri: Philippinjl [CC BY-SA 3.0 (http: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/3.0/]]. Gambar Kanan: Foto Diambil oleh Penulis MSC. Marielsa Gil.

Dalam hal ini, anggota keluarga Staphylococaee yang memberikan tes negatif ini sering disebut Staphylococcus coagulase negatif.

Ada beberapa strain yang berbeda dari S. Aureus  yang dapat menghasilkan koagulase, seperti Staphylococcus schleiferi spp coagulans, s. Hyicus, s. Intermedius dan s. Delphini.

Namun, tiga yang pertama memiliki kepentingan klinis pada tingkat hewan dan jarang dapat ditemukan sebagai agen penyebab infeksi manusia, sementara S. Delphini Itu hanya ditemukan di lingkungan laut.

Selain itu, mereka berbeda dengan mudah karena S. Hyicus Dan S. Intermedius Mereka tidak memfermentasi manitol dan S. Schleiferi spp coagulans tidak memfermentasi maltosa, atau trehalosa, sementara S. Aureus Ya fermentasi karbohidrat ini.

Kehadiran enzim koagulase telah dikaitkan dengan virulensi strain.  Namun, teori ini telah jatuh, mengingat fakta bahwa spesies koagulase negatif virulen lainnya diamati mampu menghasilkan infeksi penting.

[TOC]

Dasar

Staphylococcus aureus Ini menghasilkan dua jenis koagulase, satu yang tetap terkait dengan dinding sel, juga disebut faktor aglutinasi atau faktor reaktif koagulase (FRC), dan ekstraseluler yang dilepaskan dalam tanaman cair cair. Itulah mengapa mereka masing -masing disebut koagulase bersatu dan koagulase gratis.

Enzim koagulase berutang namanya untuk tindakan yang dihasilkannya. Ini memiliki kemampuan untuk mengubah fibrinogen menjadi fibrin, menciptakan gumpalan yang jelas saat berada dalam plasma, yaitu enzim ini mensimulasikan aktivitas trombin air terjun koagulasi air terjun.

Faktanya, salah satu teori yang paling diterima adalah bahwa koagulase bersatu bereaksi dengan koagulase bebas untuk mengaktifkan faktor koagulasi. Aktivasi ini menghasilkan zat yang bertindak mirip dengan bagaimana protrombin melakukannya, menciptakan senyawa dengan fungsi trombin.

Dapat melayani Anda: profil tiroid: fungsi hormon, pentingnya, kuantifikasi

Perbedaan dengan air terjun koagulasi normal adalah bahwa reaksi ini tidak memerlukan keberadaan kalsium dan tidak terpengaruh oleh heparin.

Untuk melakukan tes koagulase, cukup untuk menghadapi tanaman stafilokokus segar dengan plasma kelinci yang lebih disukai dan dengan demikian mengamati pembentukan atau tidak dari gumpalan gumpalan.

Ada teknik khusus untuk mendeteksi koagulase United dan koagulase bersatu dan gratis pada saat yang sama.

Beberapa strain S. Aureus Mereka memberikan hasil positif yang lebih cepat dari yang lain. Kecepatan pembentukan bekuan berbanding lurus dengan konsentrasi koagulase saat ini.

Teknik uji koagulase di slide mendeteksi United Coagulas.

Prosedur

-Tes koagulase di pemegang

Bahan

-Bersihkan slide sheet

-Plasma kelinci lebih disukai, plasma manusia atau kuda juga dapat digunakan. Plasma dapat diperoleh secara komersial diliofilisasi dan dilarutkan ketika akan digunakan atau dapat digunakan segar (baru -baru ini diambil). Alternatif lain yang layak adalah penggunaan fibrinogen.

-Larutan saline (0,85%) Steril (SSF).

Mendapatkan plasma segar

Mengekstrak darah vena manusia atau hewan. Salah satu antikoagulan berikut dapat digunakan: EDTA, kalsium oksalat, heparin atau natrium sitrat. Campur dengan baik dan centrifuge. Hapus supernatan (plasma) secara aseptik, tanpa sel darah merah dan deposit dalam tabung steril.

Pemisahan plasma. Sumber: Foto diambil oleh penulis: MSC. Marielsa Gil.

Plasma yang diliofilisasi

Direkonstitusi sebagaimana ditentukan oleh Vial Kit Komersial.

Fibrinogen segar

Dari plasma sitrat, campur plasma dengan larutan jenuh natrium klorida. Membiarkan.

Buang supernatan, rekonstitasikan endapan hingga 5 kali volumenya dengan air suling steril. Tambahkan 5 unit heparin untuk setiap ml fibrinogen. Menyimpan.

Teknik

Dalam slide setetes larutan saline dan setetes plasma ditempatkan secara terpisah. Ambil dengan pegangan platinum 1 atau 2 koloni murni mikroorganisme untuk dicoba.

Campur beban bakteri dalam penurunan plasma dan ulangi operasi di drop SSF. Perhatikan hasilnya segera. Hasil positif akan menjadi salah satu di mana pembentukan aglutinasi makroskopik (endapan putih) diamati setelah satu menit di sisi drop dengan plasma.

Ini dapat melayani Anda: Ekofisiologi: Studi dan aplikasi apa pada hewan dan sayuran

Penurunan SSF berfungsi sebagai kontrol negatif. Jika aglutinasi dengan SSF diamati, ini berarti bahwa mikroorganisme adalah aglutin diri, mampu memberikan hasil positif palsu. Dalam hal ini harus dikuatkan dengan uji tabung.

Juga disarankan untuk memasang kontrol positif dengan strain yang diketahui S. Aureus.   

Penafsiran

Aglutinasi dalam 5 hingga 20 SEG (tes positif yang kuat).

Aglutinasi variabel antara 20 detik dan satu menit (tes tertunda positif).

Tingkat aglutinasi tertentu setelah satu menit (tes yang diragukan). Disarankan untuk mengulangi tes atau mengkonfirmasi dengan metode tabung.

Tidak ada aglutinasi (tes negatif).

Hasil dengan SSF. Itu harus selalu memberikan negatif, jika hasil tes secara otomatis.

-Uji koagulase tabung

Bahan

-Tabung reaksi steril

-Plasma

-Maria bath pada suhu 37 ° C.

Teknik

Ukur dengan pipet plasma 0,5 ml steril dan letakkan di tabung reaksi 12 x 75. Muat pegangan platinum dengan 2 hingga 4 koloni murni untuk belajar dari tanaman padat dari 18 hingga 24 jam dan membagi dalam plasma dengan hati -hati, aduk dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama 4 jam.

Periksa tabung pada jam pertama tanpa mengocoknya, hanya dimiringkan dengan lembut. Jika tidak ada bekuan yang masih diamati, Anda dapat terus mengamati setiap 30 menit sampai selesai 4 jam. Jika setelah 4 jam masih negatif, itu bisa dibiarkan hingga 24 jam tetapi pada suhu kamar. Amati dan laporkan hasilnya.

Berdasarkan pengalaman, beberapa ahli mikrobiologi merekomendasikan menggunakan 500 μl suspensi bakteri dari tanaman 18 jam dalam media cair untuk melakukan tes.

Rupanya ia menawarkan hasil yang lebih cepat dan lebih dapat diandalkan daripada ketika koloni dari media padat diemulsi, terutama jika plasma manusia yang diperoleh dari bank darah telah digunakan.

Penggunaan strain dari kaldu membantu melemahkan kemungkinan adanya antibodi anti-stafilokokus manusia dalam plasma yang dapat menghambat aksi koagulase.

Penafsiran

Jika gumpalan yang menutupi semua cairan (koagulasi lengkap) atau bekuan yang tidak ada dalam cairan yang tersisa (koagulasi parsial) yang harus dianggap sebagai tes positif.

Dapat melayani Anda: cabang biologi dan apa yang mereka pelajari

Jika tidak terbentuk, yaitu, suspensi homogen, tesnya negatif.

-Tes koagulase menggunakan fibrinogen

Fibrinogen digunakan seperti plasma dan melayani baik untuk uji pemegang dan tabung. Lanjutkan seperti yang dijelaskan untuk plasma dan menafsirkan dengan cara yang sama.

Menggunakan

Itu digunakan untuk membedakan Staphylococcus aureus staphylococci koagulase negatif.

Qa

Memiliki tanaman segar dari strain S. Aureus Untuk digunakan sebagai kontrol positif. Anda juga dapat memiliki tekanan S. Epidermidis sebagai kontrol negatif.

Batasan

-Tes positif tidak boleh dibiarkan dalam inkubasi selama 24 jam, karena S. Aureus menghasilkan fibrinolisin yang melarutkan bekuannya.

-Untuk tes yang dapat diandalkan, plasma segar atau baru yang disetujui harus digunakan, dan juga penting untuk menggunakan tanaman bakteri segar (18 hingga 24 jam). Ini menghindari negatif palsu.

-Tes harus dilakukan bersama dengan kontrol negatif dan yang positif.

-Beberapa media solid dapat mengganggu uji koagulase. Itu tidak disarankan.

-Jika plasma sitrat digunakan, disarankan untuk menempatkan 5 unit heparin per ml plasma untuk menghindari positif palsu. Ini karena beberapa mikroorganisme yang berbeda dari S. Aureus Mereka bisa membusuk sitrat dan membuat gumpalan plasma. Dalam hal ini disarankan untuk melakukan tes gram dan katalase.

-Penting, dalam tes tabung, memantau reaksi setiap 30 menit, karena ada strain S. Aureus yang menghasilkan fibrinolisin konsentrasi tinggi dan akan mencairkan gumpalan bekuan yang baru terbentuk. Hindari negatif palsu.

-Saat memantau tes, tabung harus dihindari secara tiba -tiba, ini dapat menghancurkan awal pembentukan gumpalan yang tidak akan dipulihkan, menyebabkan negatif palsu.

Referensi

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri pentingnya klinis. Edisi ke -3. Editorial Pan -American. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratorium Pro-Lab. Kelinci coagulate plasma. Tersedia di: pro-lab.com
5. "Coagulase." Wikipedia, ensiklopedia gratis. Feb 2019, 04:23 UTC. ABR 2019, 15:50 Wikipedia.org.