Karakteristik pewarnaan hematoxylin-eosin, penggunaan, teknik

Itu Pewarnaan hematoxylin - eosin Ini adalah teknik warna yang menggunakan kombinasi pewarna hematoxylin dan eosin. Sepasang pewarna ini menjadi duo yang sempurna, karena hematoxylin bertindak sebagai pewarna dasar dan eosin adalah pewarna asam.

Penunjukan pewarna basa atau asam tidak merujuk pada pH yang mereka peroleh dalam larutan, tetapi lebih banyak berbicara tentang proporsi yang berlaku dalam hal beban anionik atau kationik yang mereka miliki atau dengan lokasi kromofor.

Epitel silinder yang diwarnai dengan hematoxylin - eosin (HE) Sumber: Todd Straus dan Vladimir Osipov [CC oleh 3.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/oleh/3.0)]

Dalam hal ini, hematoxylin dianggap sebagai pewarna dasar (kationik) dan karenanya memiliki afinitas untuk struktur asam, seperti inti sel. Sementara eosin menjadi pewarna asam (anionik) memiliki afinitas untuk alkali atau struktur dasar, seperti sitoplasma sel.

Untuk alasan ini, kombinasi pewarna ini banyak digunakan untuk menodai. Inti berwarna biru gelap atau ungu dan sitoplasma merah muda.

Pewarnaan hematoxylin-eosin adalah salah satu teknik pewarnaan yang paling banyak digunakan di bidang histologi dan sitologi, karena penanganannya yang mudah dan biaya rendah. Ini digunakan untuk visualisasi sel, serat saraf tebal dan adanya mikroorganisme jaringan tertentu, seperti: parasit, jamur dan bakteri, antara lain.

[TOC]

Karakteristik

Hematoxylin

Hematoxylin adalah pewarna netral. Namun, komponen yang menyediakan warna (kromofor) terletak di pusat kationik atau dasar molekul. Karenanya afinitasnya terhadap struktur asam. Formula kimianya adalah C₁₆H₁₄SALAH SATU₆ dan nama ilmiahnya 7.11b-Dihydroindeno [2,1-C] Chromene-3, 4.6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Jaga agar pusat sel terutama, karena ini sangat kaya akan asam nukleat. Anda juga dapat mewarnai inklusi sitoplasma yang berasal dari virus.

Sehingga hematoxylin dapat pewarna harus dalam keadaan teroksidasi dan melekat pada logam. Yang terakhir akan berfungsi untuk melihat kain, yaitu, itu akan bertindak sebagai mordan.

Saat hematoxylin teroksidasi, hematin disebut. Oksidasi dicapai dengan paparan oksigen (penuaan) reagen atau zat yang membantu oksidasi (oksidasi kimianya).

Itu dapat melayani Anda: metode pemisahan campuran heterogen

Eosina

Eosina adalah pewarna merah atau merah muda. Itu tidak larut dalam air meskipun ada versi hydrosoluble. Secara umum, eosina menyiapkan larut alkohol (etanol pada 95).

Noda sitoplasma, serat otot, organel sitoplasma dan kolagen, tetapi tidak mewarnai pusat sel. Ini karena bermuatan negatif, oleh karena itu, ia memiliki afinitas untuk struktur yang dimuat secara positif.

Ada dua jenis eosina "y" dan "b". Eosina "y" dikenal sebagai eosina kuning. Nama ilmiahnya adalah fluorescein tetrabrome dan formula kimianya adalah C_{dua puluh}H₈Br₄SALAH SATU₅.

Di sisi lain, eosin "b" kadang -kadang disebut eritrosin kebiruan b. Nama ilmiahnya adalah fluorescein dibromodinitro dan formulanya c_{dua puluh}H₈Br₂N₂SALAH SATU₉. Keduanya sangat mirip dan perbedaan menggunakan satu atau yang lain tidak terlalu terlihat. Namun, yang paling populer adalah eosina "y".

Eosin memiliki sifat membedakan antara sel hidup dan mati, karena hanya mampu melewati membran untuk mewarnai sitoplasma ketika sel mati, meninggalkan sitoplasma sel yang tidak berwarna jika tetap hidup.

Aplikasi

Pewarnaan serat saraf

Dengan hematoxylin-eosin, serat saraf tebal dapat diwarnai dan diidentifikasi. Namun, tidak berguna untuk mewarnai serat saraf tipis, karena untuk memvisualisasikan yang terakhir diperlukan warna perak.

Anak -anak pemotongan kulit histologis

Di stadion lapisan kornea kulit, pewarna yang bertindak adalah eosin, karena pada tingkat ini sel -sel tidak memiliki nukleus.

Di lapisan granulosa kulit, hematoxylin noda kuat ke butiran keratohialin yang ditemukan di dalam sel granular. Sebaliknya, strata thorny kulit diwarnai dengan hematoxylin, sedangkan lapisan basal atau kuman jika cukup diwarnai.

Eosin menodai sitoplasma semua sel dan intensitas warna dapat bervariasi antara satu lapisan dan lainnya.

Pewarnaan pewarnaan dengan hematoxylin-eosin

Gómez dan kolaborator, pada tahun 2005 mereka menunjukkan bahwa pewarnaan dengan hematoxylin -eosin lebih efektif dalam mengidentifikasi kasus amibiasis oleh Entamoeba histolytica Dan Entamoeba berbeda bahwa metode visualisasi segar (larutan saline dan lugol) pada pasien dengan penyakit diare akut.

Dapat melayani Anda: alkohol sekunder: apa itu, struktur, sifat, penggunaan

Itu juga menunjukkan bahwa ia memiliki sensitivitas yang besar untuk mendeteksi eritrofagositosis (amuba yang memiliki eritrosit fagosit).

Pewarnaan pemotongan histologis untuk diagnosis infeksi

Walwyn dan kolaborator, pada tahun 2004 mereka mengusulkan penggunaan pewarnaan histologis untuk mendeteksi mikroorganisme yang menyebabkan infeksi.

Menggunakan warna hematoxylin-eosin yang berhasil memvisualisasikan infeksi yang disebabkan oleh Clostridium, Actinomyces, Spiril atau Candida. Mereka juga berhasil mengamati keberadaan parasit Sarcoptes Escabiei Dalam potongan kulit dan inklusi virus oleh cytomegalovirus dan herpes dalam potongan jaringan yang berbeda.

Teknik

Untuk sampel histologis

Pewarnaan pemotongan histologis melewati serangkaian langkah. Yang pertama adalah mendapatkan pemotongan histologis. Ini harus dibandingkan dan kemudian mendapatkan potongan (ultra-sirip) dengan mikrotom. Teknik ini terdiri dari langkah -langkah berikut:

1-Malermasi Kelebihan Parafin: Xilol atau hemo -d dapat digunakan, terendam selama 3-5 menit.

2-relief sampel: Ini dicapai dengan merendam sampel dalam konsentrasi alkohol (etanol) yang berbeda dalam urutan menurun (100 °, 90 °, 70 °). Dalam semua kasus selama 7 menit.

3-eliminasi kelebihan alkohol: Untuk melakukan ini, itu terbenam dalam air selama 7 menit.

4-koleksi dengan hematoxylin: Sampel terendam 6-10 menit pada nampan yang mengandung hematoxylin. Waktu paparan tergantung pada ukuran dan ketebalan sampel.

5-eliminasi kelebihan hematoxylin: Air dicuci selama 5 menit dan kemudian lorong cepat (10-20 detik) dibuat oleh alkohol asam. Kemudian dicuci dengan air lagi selama 5 menit. Kemudian direndam dalam etanol pada 96 ° per 1 menit.

6-warna dengan Eosina: Untuk melakukan ini, sampel selama 5 menit di baki eosina terbenam.

7-deshydration dari sampel: Untuk melakukan ini, baki alkohol (etanol) dilewatkan lagi, tetapi kali ini dalam urutan naik. (70 °, 90 °, 100 °). (Selama 5 detik, 5 detik, masing -masing 1 menit).

Klarifikasi 8-sampel: Ini terpapar xylol selama 5-10 menit dan mengering untuk disegel secara permanen dengan canada balsem atau bahan serupa lainnya.

Untuk sampel tinja untuk mencari DAN. histolytica

Dalam lamella diperpanjang dengan tinja pasien dan diperbaiki dengan alkohol 80% selama 5 menit. Lembarannya tenggelam dalam hematoxylin selama 5 menit dan segera dicuci dengan air.

Dapat melayani Anda: Kontribusi dari Kimia ke Kedokteran

Selanjutnya, dengan cepat direndam dalam alkohol asam dan kemudian dalam air amoniak. Cuci dengan air. Itu diwarnai selama 5 menit di Eosina. Sampel didehidrasi seperti yang dijelaskan dalam teknik sebelumnya dan akhirnya diklarifikasi dengan Xileno.

Persiapan reagen

- Hematoxylin

Dalam satu liter air suling, larut 50 gram kalium atau amonium aluminium sulfat. Saat Anda benar -benar larut, tambahkan 1 gram hematoxylin mengkristal. Saat melarutkan secara keseluruhan, 1 gr asam sitrat ditambahkan bersama dengan 50 gr hidrat kloral dan 0,2 gr natrium iodinus.

Campuran direbus selama 5 menit, kemudian dibiarkan dingin dan disaring untuk menghilangkan partikel padat yang tetap ada. Reagen dengan demikian disiapkan dapat digunakan segera.

- Eosina

Itu bisa disiapkan dengan alkohol atau alas berair.

Eosin alkohol

Dalam 100 ml etanol pada 95 ° larut 0,5 gram eosina "y". Kemudian tambahkan beberapa tetes asam asetat glasial.

2% Eosin berair

Dalam 1250 ml air suling, larut 25 gram eosin "y" hydrosoluble. Kemudian tambahkan beberapa tetes asam asetat glasial.

Alkohol asam

Ukur 0,5 mL asam klorida terkonsentrasi dan lengkap 100 mL dengan alkohol absolut.

Air amoniak

Ukur 0.5 ml amonia terkonsentrasi dan lengkap 100 mL dengan air suling.

Referensi

1. Navarrete, g. Histologi Kulit. Rev fac med unam 2003; 46 (4): 130-133. Tersedia di: Medigrafi.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela atau.
3. Identifikasi Entamoeba histolytica/e. berbeda Untuk teknik Amiba segar vs pewarnaannya dengan hematoxyin-eosin dalam diare akut. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Tersedia di: Medigrafi.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Kegunaan teknik histologis untuk diagnosis infeksi pada potongan anatomi. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Tersedia di: Scielo.Sld
5. PanReac Applichem ITW Reagnts. Pewarnaan hematoxylin-eosin. 2017, Spanyol. Tersedia di: itwreagnts.com
6. “Eosina." Wikipedia, ensiklopedia gratis. 7 Nov 2018, 08:18 UTC. 4 2019, 22:13 adalah.Wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, ensiklopedia gratis. Mei 2019, 11:23 UTC. 4th 2019, 22:48 Wikipedia.org