Yayasan Histokimia, Pemrosesan, Pewarnaan

Itu Histokimia Ini adalah alat yang sangat berguna dalam studi morfologi berbagai jaringan biologis (sayuran dan hewan), karena prinsip reaksi komponen jaringan seperti karbohidrat, lipid dan protein, antara lain, dengan pewarnaan zat mewarnai.

Alat berharga ini memungkinkan tidak hanya untuk mengidentifikasi komposisi dan struktur jaringan dan sel, tetapi juga berbagai reaksi yang terjadi dalam hal ini. Demikian juga, kemungkinan kerusakan jaringan, yang disebabkan oleh keberadaan mikroorganisme atau patologi lainnya.

Pewarnaan histokimia. Virus Nil, Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Sumber: Pixinio.com/wikipedia.org/nefron [cc by-sa 3.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/3.0)]/cdc/dr. George p. Kubica [domain publik]

Histokimia, sejak abad -abad terakhir telah memberikan kontribusi penting, seperti demonstrasi keberadaan penghalang sel darah oleh Paul Ehrlich. Ini dimungkinkan berkat fakta bahwa otak hewan eksperimen yang digunakan oleh Ehrlich tidak mewarnai dengan anilin, yang merupakan pewarna dasar.

Hal ini menyebabkan penggunaan berbagai pewarna seperti metilen dan biru indophenol, untuk mewarnai berbagai jenis sel. Temuan ini memunculkan klasifikasi sel dalam asidofilik, basofilik dan neutrofil, menurut pewarnaan spesifiknya.

Studi terbaru telah menerapkan teknik ini untuk menunjukkan keberadaan berbagai senyawa, termasuk fenol, serta karbohidrat dan lipid non -struktural pada spesies spesies tersebut Litsea glaucescens, Terkenal sebagai Laurel. Menjadi ini, baik di dalam lembaran maupun di dalam kayu.

Demikian juga Colares et al, 2016, mengidentifikasi pabrik bunga obat Tarenaya Hassleriana, melalui teknik histokimia. Dalam spesies ini keberadaan pati, mirosina, serta senyawa fenolik dan lipofilik dibuktikan.

[TOC]

Dasar

Histokimia didasarkan pada pewarnaan struktur seluler atau molekul yang ada di jaringan, berkat afinitasnya dengan pewarna spesifik. Reaksi warna struktur atau molekul ini dalam format aslinya, selanjutnya divisualisasikan dalam mikroskop optik atau mikroskop elektronik.

Spesifisitas pewarnaan disebabkan oleh adanya kelompok penerimaan ion yang ada dalam sel atau molekul jaringan.

Akhirnya, tujuan reaksi histokimia adalah untuk dapat bukti melalui pewarnaan. Dari struktur biologis terbesar ke jaringan dan sel terkecil. Ini dapat dicapai berkat fakta bahwa pewarna bereaksi secara kimia dengan molekul jaringan, sel atau organel.

Itu bisa melayani Anda: apa itu gastrasi?

Penuntutan

Reaksi histokimia dapat menyebabkan langkah sebelum realisasi teknik, seperti fiksasi, inklusi dan pemotongan jaringan. Oleh karena itu, harus diperhitungkan bahwa dalam langkah -langkah ini Anda dapat merusak struktur yang ingin Anda identifikasi, melemparkan hasil negatif palsu, bahkan jika ada.

Meskipun demikian, fiksasi jaringan sebelumnya yang dilakukan dengan benar adalah penting, karena ia mencegah autolisis atau kerusakan sel. Untuk ini.

Dimasukkannya jaringan dilakukan sehingga mempertahankan ketegasannya saat memotong dan dengan demikian mencegahnya menjadi cacat. Akhirnya, pemotongan dilakukan dengan mikrotom untuk studi sampel dengan mikroskop optik.

Selain itu, sebelum melanjutkan untuk melakukan pewarnaan histokimia, disarankan untuk menggabungkan kontrol positif eksternal atau internal di setiap batch tes. Serta penggunaan pewarna spesifik untuk dipelajari struktur.

Pewarnaan histokimia

Dari munculnya teknik histokimia hingga saat ini, berbagai pewarna telah digunakan, di antaranya penggunaan yang paling sering seperti: Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen dan Gram.

Demikian juga, pewarna lain lebih jarang digunakan seperti tinta Cina, orcein atau pewarnaan trichromic Masson, antara lain.

Asam Periódic Schiff (PAS)

Dengan warna ini Anda dapat melihat molekul dengan kandungan karbohidrat tinggi, seperti: glikogen dan musin. Namun, ini juga berguna untuk identifikasi mikroorganisme seperti jamur dan parasit. Selain struktur tertentu (membran basal) di kulit dan di jaringan lain.

Fondasi pewarnaan ini adalah bahwa oksida mewarnai ikatan karbon yang ada di antara dua kelompok hidroksil di dekatnya. Ini menghasilkan pelepasan kelompok aldehida, dan ini terdeteksi oleh reagen Schiff, melempar warna ungu.

Reagen Schiff terdiri dari fuchsin dasar, natrium metabisulfit dan asam klorida, komponen -komponen ini bertanggung jawab atas pewarnaan ungu, ketika kelompok aldehida hadir. Jika tidak, asam tidak berwarna dihasilkan.

Dapat melayani Anda: isomerase: apa itu, fungsi, nomenklatur, tipe

Intensitas mewarnai akan tergantung pada jumlah kelompok hidroksional yang ada di monosakarida. Misalnya dalam jamur, membran basal, mucinas dan glikogen warnanya bisa berubah dari merah ke ungu, sedangkan inti berwarna biru dicat.

Grocott

Ini adalah salah satu pewarnaan yang menghadirkan sensitivitas terbesar dalam identifikasi jamur dalam jaringan yang termasuk dalam parafin. Ini memungkinkan identifikasi berbagai struktur jamur: hifa, spora, endospora, antara lain. Oleh karena itu, ini dianggap sebagai pewarnaan rutin untuk diagnosis mikosis.

Terutama digunakan dalam diagnosis mikosis paru seperti pneumokistosis dan aspergilosis yang disebabkan oleh beberapa jamur genre Pneumocystis Dan Aspergillus, masing -masing.

Larutan ini mengandung nitrat asam perak dan kromik, yang terakhir menjadi fiksatif dan pewarna. Fondasi adalah bahwa asam ini menghasilkan oksidasi hidroksil menjadi aldehida, oleh lendir yang ada dalam struktur yang dipetik, misalnya di dinding sel jamur.

Akhirnya, kehadiran perak dalam larutan dioksidasi oleh aldehida, menyebabkan warna hitam, yang disebut reaksi argentafin. Anda juga dapat menggunakan pewarna kontras seperti hijau muda dan dengan demikian struktur jamur hitam dengan latar belakang hijau muda akan diamati.

Ziehl-Neelsen

Pewarnaan ini didasarkan pada adanya resistensi asam-alkohol, sebagian atau total, dalam beberapa mikroorganisme seperti genre Nocardia, Legionella dan Mycobacterium.

Penggunaan pewarnaan ini direkomendasikan, karena dinding sel mikroorganisme yang dikutip sebelumnya, mengandung lipid kompleks yang menghambat penetrasi pewarnaan. Terutama di sampel saluran pernapasan.

Pewarna yang kuat seperti fenicada fuchsin (pewarna dasar) digunakan di dalamnya dan panas diterapkan sehingga mikroorganisme dapat mempertahankan pewarna dan tidak berubah warna dengan asam dan alkohol. Akhirnya, larutan metilen biru diterapkan untuk mewarnai struktur yang telah berubah warna.

Kehadiran resistensi asam-alkohol diamati pada struktur merah, sedangkan struktur yang tidak tahan terhadap perubahan warna biru dicelup.

Gram dan tinta Cina

Gram adalah warna yang sangat berguna dalam diagnosis infeksi bakteri dan jamur, antara lain. Warna ini memungkinkan untuk membedakan antara mikroorganisme positif gram dari gram negatif, dengan jelas membuktikan perbedaan yang ada dalam komposisi dinding sel.

Dapat melayani Anda: lipid yang dapat diaponifikasi: karakteristik, struktur, fungsi, contoh

Sementara tinta Cina adalah pewarnaan yang digunakan untuk membandingkan struktur yang mengandung polisakarida (kapsul). Ini karena cincin terbentuk di lingkungan, dimungkinkan di Cryptococcus neoformans.

Orcein

Dengan pewarnaan ini, serat elastis dan kromosom dari berbagai sel diwarnai, memungkinkan evaluasi proses pematangan yang terakhir. Karena alasan ini, sangat berguna dalam studi sitogenetik.

Ini didasarkan pada pengumpulan pewarna dengan beban negatif molekul seperti DNA, hadir di pusat -pusat berbagai sel. Jadi ini dicat biru ke violet gelap.

Trichromic Masson

Pewarnaan ini digunakan dalam identifikasi beberapa mikroorganisme atau bahan yang mengandung pigmen mellatic. Ini adalah kasus mikosis, yang disebabkan oleh jamur dematiac, ugohifomicosis dan pada eumicetoma butir hitam.

Pertimbangan akhir

Dalam beberapa tahun terakhir ada banyak kemajuan dalam penciptaan teknik diagnostik baru, di mana histokimia terlibat tetapi terkait dengan yayasan atau prinsip lain. Teknik -teknik ini mengejar tujuan yang berbeda, seperti halnya dengan imunohistokimia atau enzimohistokimia.

Referensi

1. Acuña U, Elguero J. Histokimia. Sebuah. Chem. 2012; 108 (2): 114-118. Tersedia di: Are.IQM.CSIC.adalah
2. Mestanza r. Frekuensi pewarnaan histokimia PAS, Grocott dan Ziehl-Neelsen yang digunakan untuk identifikasi mikroorganisme, dilakukan dalam layanan anatomi patologis Rumah Sakit Spesial Eugenio Espejo pada tahun 2015. [Tesis sarjana]. Universitas Pusat Ekuador, Quito; 2016. Tersedia di: dspace.Uce.Edu
3. Tapia-Torres N, De La Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaas A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Histokimia, kandungan total fenol dan aktivitas antioksidan daun dan kayu Litsea glaucescens Kunth (Laureaceae). Kayu dan hutan. 2014; 20 (3): 125-137. Tersedia di: Redalyc.org
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S, Arambarri, AM. Anatomi dan Histokimia Tarenaya Hassleriana (Cleomaceae), semacam bunga obat. Buletin Amerika Latin dan Karibia dari tanaman obat dan aromatik 2016; 15 (3): 182-191. Tersedia di: Redalyc.org
5. Bonifaz a. Mikologi medis dasar. Edisi ke -4. Meksiko: McGraw-Hill Inter-American Editors, S.KE. dari c.V. 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Dalian. Analisis Patologis dan Imunohistokimia Klinik dari Karsinoma Sel Skuamosa Sel Spindle Lidah: Kasus Langka. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): ERC4610. Tersedia dari: Scielo.Br