Pewarnaan Wright

Berbagai darah perifer yang diwarnai dengan pewarnaan Wright. KE. Leukemia akut b. Plasmodium vivax dalam eritrosit. C. Plasmodium falciparum, macrogametocito. D. Limfosit

Apa pewarnaan Wright?

Itu Pewarnaan Wright Ini adalah teknik warna yang dibuat oleh ahli patologi Amerika James Homer Wright pada tahun 1902, berdasarkan pewarnaan Romanowsky, untuk lebih membedakan berbagai jenis sel darah. 

Warna ini bersifat polikromatik, yang berarti menghasilkan beberapa warna tergantung pada struktur yang menyerap pewarna. Teknik warna ini telah banyak digunakan untuk melakukan sel darah putih yang berbeda dan mempelajari morfologi sel darah merah, trombosit dan leukosit dalam darah perifer dan sumsum tulang.

Penerapannya sangat penting, karena kelainan dapat dilihat pada garis sel darah yang berbeda, memfasilitasi diagnosis penyakit seperti leukemia atau infeksi bakteri atau parasit.

Mungkin ini adalah aplikasi yang paling umum di mana teknik ini digunakan, namun, mereka bukan satu -satunya. Ini juga berguna dalam sampel lain selain darah dan sumsum tulang, seperti sampel sekresi hidung, lendir tinja, dahak, kulit, antara lain.

Fondasi pewarnaan Wright

Pewarnaan Wright lahir dari noda Romanowsky.

Campuran pewarna yang digunakan dalam pewarnaan Wright menyebabkan efek yang dikenal sebagai Romanowsky, yaitu, memberikan warna ungu yang indah untuk inti leukosit dan butiran neutrofilik, sedangkan sel darah merah dicelup merah muda.

Komponen yang bertanggung jawab untuk memberikan berbagai warna khas pewarnaan Wright adalah Biru B dan Eosina dan. Efek yang diamati akan tergantung pada hubungan pewarna dengan struktur kimia dan interaksi biru B dan eosin dan.

Struktur asam, seperti asam nukleat, protein nuklir dan sitoplasma reaktif yang belum matang dari beberapa jenis sel, set biru B (pewarnaan dasar).

Sementara struktur dasar, seperti hemoglobin, butiran eosinofil tersegmentasi, di antara struktur sel lainnya, atur eosin dan (pewarnaan asam).

Hasil pewarnaan dapat dipengaruhi oleh faktor yang berbeda, seperti pH pewarna Wright, solusi redaman dan pencucian, serta pewarnaan dan waktu pemasangan.

Oleh karena itu, setiap langkah dalam persiapan reagen sangat penting dan harus dilakukan untuk mengurus setiap detail.

Bahan

Wright Dye. Untuk 100 ml diperlukan:

Beratnya 0.3 gr pewarna wright, ukur 97 ml metanol dan 3 ml gliserol.

Persiapan

Di tempat mortir dalam jumlah besar pewarna Wright dan secara bertahap menggabungkan gliserol sampai debu benar -benar larut.

Selanjutnya, metanol ditambahkan, dicampur dan dituangkan ke dalam botol kuning.

Sebelum menggunakan, solusi dengan gerakan lembut dan filter harus diaduk.

Dapat melayani Anda: seleksi terarah: apa itu, definisi, contoh

Solusi buffered buffer

Dalam satu liter air suling, 3,76 g disodium hidrofosfat ditambahkan (NA₂HPO₄   2h₂0) ditambah 2,1 gr dari kalium fosfat dihidrogen (KH₂PO₄).

Campur dengan sangat baik sampai Anda melarutkan semua reagen yang digabungkan. Sesuaikan pH ke 7.2.  Tuang ke dalam stoples kaca dan jaga pada suhu kamar.

Bahan tambahan yang diperlukan untuk melakukan warna

Selain itu, bahan lain diperlukan untuk melaksanakan teknik warna, ini adalah: objek porta atau menutupi benda, jembatan warna, kaset dengan air atau buffer untuk dicuci, stopwatch untuk mengambil waktu warna dan beberapa bahan pengeringan (kertas penyerap, kasa atau kapas atau kapas ).

Komponen Pewarnaan Wright

Metanol

Alkohol (metanol) berfungsi sebagai pemecah darah dari noda darah ke slide.

Pada dasarnya ini adalah pengurangan reaktif, dehidrator dan fiksatif koagulan. Oleh karena itu, fungsinya adalah untuk mengkoagulasi protein dan membuatnya tidak larut, tetapi tanpa didenaturasi.

Metanol adalah reagen yang paling banyak digunakan untuk memperbaiki noda di semua laboratorium, karena memberikan hasil yang lebih baik daripada yang diperoleh dengan etanol. Konsentrasi yang ideal adalah 99%.

Penyerap guncangan

Penyerap kejut (larutan buffered), memiliki fungsi menyesuaikan atau mempertahankan.

Lintasan pemasangan dengan sel metanol dehidrat dan penyerap guncangan membantu merehidrasi mereka.

Eosina (Y)

Eosina memiliki afinitas untuk komponen dasar karena itu adalah pewarna asam. Dua jenis eosin diketahui sangat mirip satu sama lain, begitu banyak sehingga dapat digunakan, memperoleh hasil yang sama.

Salah satunya disebut eosin dan, eosin kuning atau tetrabromofluorescein, dan yang lainnya, eosin B, kebiruan e eritrosine atau dibromodyitrofluorescein. Namun, eosin dan yang paling sering digunakan.

Properti terpenting dari pewarna ini adalah polaritas negatifnya, ini membuatnya tertarik dengan struktur seluler dengan beban positif.

Methylene Blue

Adalah pewarna dasar. Properti utamanya adalah metacromia, yaitu, tidak semua struktur akan dicelup dengan warna yang sama, itu akan tergantung pada komposisi kimia dari struktur yang mewarnai.

Beberapa akan menjadi terang atau biru tua, dan yang lain dari ungu gelap atau lilac pucat.

Teknik

1. Buat sampel yang diperluas sehingga ada film tipis, baik pada slide atau penutup.
2. Biarkan udara kering selama sekitar 2 jam.
3. Tempatkan bau kering di jembatan pewarnaan atau ember pewarnaan dengan sampel yang diperpanjang ke atas.
4. Tutupi lembar dengan drop wright by geta untuk menutupi seluruh permukaan. Tinggalkan tindakan selama 5-8 menit.
5. Pewarna harus sepenuhnya menutupi slide, tanpa menumpahkan melalui tepi. Jika selama waktu pewarnaan mulai menguap, tetes tambahan harus ditempatkan.
6. Selanjutnya tambahkan jumlah penyerap guncangan yang sama, tiup sedikit sampai kecerahan logam karakteristik muncul. Jinak 10 hingga 15 menit.
7. Cuci dengan air keran, letakkan jet lunak sampai lembarannya terlihat merah muda.
8. Dengan kain kasa yang diresapi dengan alkohol menghilangkan pewarnaan di bagian belakang slide.
9. Biarkan apusan mengering sebelum menempatkan minyak perendaman untuk memvisualisasikannya di mikroskop.

Dapat melayani Anda: tingkat taksonomi

Penggunaan/Aplikasi Pewarnaan Wright

Hematologi

Sangat ideal untuk pewarnaan rubb darah tepi.

Karena sifat kimia dari kombinasi pewarna ini, struktur sel dapat dengan mudah dikenali, mampu membedakan berbagai jenis sel yang ada.

Pilek

Teknik ini sangat berguna untuk mengidentifikasi sel -sel sekresi hidung (sel epitel, eosinofil tersegmentasi, polimorfonuklear) dalam diagnosis rinitis alergi.

parasitologi

Dalam hal ini, ini telah berguna untuk studi Leishmania sp Dalam histiosit jaringan sel subkutan di ulkus kulit. Ini juga digunakan untuk mengidentifikasi leukosit dalam sampel tinja (leukogram tinja).

Dalam hal ini, menarik bagi dokter untuk mengetahui apakah leukositosis yang ada dalam tinja adalah dengan polimorfonuklear atau mononuklear. Temuan ini dalam leukogram tinja ini akan memandu apakah itu masing -masing infeksi bakteri atau virus.

Di sisi lain, parasit yang bersirkulasi dalam darah bisa berada di dalam eritrosit atau bebas dalam plasma. Parasit yang dicari adalah Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii dan filarias, dan di kedokteran hewan berguna dalam pencarian Theilery equ Dan Babesia Caballi, Agen kausal bayi, terutama pada kuda.

Warna Wright, dan juga Giemsa, memungkinkan untuk membedakan hemoparasit dari komponen seluler normal. Untuk ini, dua jenis yang diperluas dapat digunakan:

Halus diperpanjang

Darah diperpanjang sebagai film tipis pada slide. Pewarnaan Wright, mengungkapkan karakteristik nukleus dan sitoplasma.

Drop tebal

Metodologi ini digunakan untuk menyelidiki keberadaan parasit dalam jumlah darah yang lebih besar.

Untuk ini setetes besar darah ditempatkan pada slide. Sesama di sana Anda harus defibrine, membuat lingkaran yang lebih besar dan lebih besar dari tengah, menggunakan tepi slide lain.

Akhirnya, untuk mengamati parasit dalam bau tebal, eritrosit harus terdaftar dengan air.

Infeksi pernapasan

Pada tingkat pernapasan, teknik ini juga berguna, karena sel -sel yang ada dalam sampel dahak, pencucian bronkial atau bronkalveolar penting untuk menetapkan diagnosis.

Di sini Anda dapat membedakan sel polimorfonuklear dan sel mononuklear.

Bakteriologi

Penggunaan teknik ini dalam bakteriologi terbatas, karena tidak baik untuk mewarnai bakteri. Oleh karena itu, untuk pewarnaan mereka, teknik warna khusus lainnya digunakan.

Namun, telah digunakan untuk mencari sel epitel dengan badan inklusi Chlamydia trachomatis Dalam noda mukosa uretra atau endoserviks, meskipun harus diakui bahwa itu bukan metode terbaik.

Itu bisa melayani Anda: hemocianin

Juga dimungkinkan untuk mengamati, di antara sel darah merah, bakteri spiral, seperti Borrelia Burgdorferi Pada pasien yang terinfeksi, serta morula atau tubuh dimasukkan Ehrlichia sp Dalam sitoplasma limfosit, monosit atau neutrofil dalam noda darah.

Ilmu jamur

Dia Histoplasma capsulatum Ini adalah jamur patogenik yang sering didiagnosis dengan pengamatan mikroskopis dari berbagai sampel jaringan, pewarnaan dengan pewarnaan Wright.

Bagaimana struktur sampel darah diamati dengan pewarnaan Wright?

Rekomendasi untuk Srols Sanguineous untuk Pembacaan Hemogram. Sumber: Retamales E, Mazo V. Lembaga Kesehatan Masyarakat, Pemerintah Chili

Rekomendasi untuk pewarnaan yang baik

- Perpanjangan sampel darah harus dikeringkan secara spontan. Noda harus setipis mungkin untuk mendapatkan fiksasi pewarna yang lebih baik dan menghindari tumpang tindih.

- Untuk pewarnaan berkualitas tinggi, disarankan. Di sisi lain, sampel yang ideal adalah darah kapiler, tanpa antikoagulan.

- Namun, jika darah vena digunakan, itu harus digunakan sebagai antikoagulan EDTA dan non -heparin, karena yang terakhir dapat merusak struktur seluler.

- Untuk menghindari kerusakan pewarna yang disiapkan, itu harus disimpan di tempat kering.

- Selama proses pencucian, penggunaan air yang disesuaikan dengan pH netral.

- Disarankan untuk menguji metode pewarnaan yang digunakan di laboratorium dari waktu ke waktu.

Ini dilakukan sampel pewarnaan atau pola yang diperluas, sebagai kontrol kualitas. Langkah ini penting, karena dipastikan bahwa pewarnaan disiapkan dengan benar dan waktu pewarnaan distandarisasi dengan baik.

Jika lembar pola berwarna buruk, maka ada masalah yang harus diselesaikan.

Kesalahan umum dalam warna Wright

Pewarnaan yang sangat pucat

Noda yang sangat pucat biasanya disebabkan oleh waktu pewarnaan yang sangat singkat atau pencucian yang sangat berlebihan. Itu diperbaiki dengan memperpanjang waktu kontak dengan pewarna atau mengurangi waktu pencucian.

Lonceng pewarna

Kehadiran pewarnaan endapan dalam bau dapat memiliki beberapa penyebab. Yang paling sering adalah: penggunaan pewarna yang tidak difilter, pewarna pada jembatan warna yang tidak rata, memakai lembaran kotor dengan debu atau lemak, tidak membuat pencucian yang baik saat pewarnaan selesai.

Menggosok dengan warna yang sangat kemerahan atau biru

Penyerap guncangan bertanggung jawab atas pH pewarna. Warna dengan pH di bawah yang ditunjukkan (asam) akan menghasilkan bau yang sangat kemerahan.

Jika pH pewarna di atas (alkali) akan mendapatkan noda yang sangat kebiruan.

Mode penyimpanan

Reagen harus disimpan pada suhu kamar.

Referensi

1. López-Jácome, l., Hernández-Durán, m., Colín-Castro, c., Ortega-Peña, s., Cerón-González, g., Franco-Cendejas, f. (2014). Pewarnaan dasar di laboratorium mikrobiologi. Penelitian Disabilitas.
2. Calderón, a., Cardona, J., Vergara, atau. (2013). Frekuensi Babesia SPP. Di Horses of Montería, Córdoba (Kolombia). Putaran. Disculg Udcaaktual. Ilmuwan. 
3. Retamales, e., Mazo, v. Institut Kesehatan Masyarakat Chili. Rekomendasi untuk Srols Sanguineous untuk Pembacaan Hemogram.