Pewarnaan negatif

Gambar pewarnaan negatif virus flu a. Sumber: Lihat Halaman untuk Penulis, Wikimedia Commons

Apa itu pewarnaan negatif?

Itu Pewarnaan negatif Ini adalah metode pewarnaan khusus untuk menyoroti keberadaan kapsul dalam beberapa mikroorganisme -manis Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae Dan Cryptococcus neoformans-, dari sampel klinis atau tanaman murni.

Sampel langsung yang digunakan secara langsung untuk menerapkan pewarnaan negatif adalah cairan serebrospinal. Teknik ini merupakan alternatif yang cepat untuk diagnosis meningitis dugaan, terutama oleh Cryptococcus neoformans.

Pewarnaan ini dapat diterapkan pada sputum steril dan cairan secara umum, serta pada strain yang diperoleh dari tanaman murni muda. Teknik ini menggunakan nigrosine atau tinta Cina untuk pelaksanaannya, oleh karena itu, ini adalah metodologi yang sangat sederhana dan ekonomis untuk diterapkan yang memberikan informasi nilai diagnostik yang hebat dalam waktu singkat.

Dalam hal ini, laboratorium apa pun dalam kemampuan melakukan warna ini. Tentu saja, laboratorium harus memiliki personel yang kompeten, mampu mengenali ragi dari Cryptococcus neoformans terisolasi atau dalam permata dan membedakannya dari leukosit dan artefak yang dapat disajikan oleh sampel.

Dasar

Nigrosine dan Tinta Cina bertindak sama, sehingga salah satu zat dapat digunakan secara tidak jelas.

Teknik ini disebut pewarnaan negatif karena bertindak bertentangan dengan teknik pewarnaan lainnya. Dalam hal ini, apa yang tanpa pewarnaan adalah struktur yang sedang dicari atau yang ingin Anda lihat, yaitu, mikroorganisme.

Oleh karena itu, pewarnaan didasarkan pada pewarnaan bagian bawah noda dalam warna gelap. Dalam skenario ini, struktur terkapsulasi akan menyoroti cahaya atau tidak berwarna.

Biasanya, ragi diamati, dikelilingi oleh lingkaran lingkaran yang sesuai dengan kapsul. Ini terjadi karena tinta Cina dan nigrosin adalah zat yang tidak dapat menembus polisakarida yang membentuk kapsul mikroorganisme hidup.

Dapat melayani Anda: fermentasi butyric

Perlu dicatat bahwa struktur lain yang mungkin ada dalam sampel langsung, seperti leukosit atau sel darah merah.

Sekarang, jika mikroorganisme mati, tingtur dapat menembus ke dalamnya, sehingga pewarnaan ini juga berguna untuk mengevaluasi kelayakan mikroorganisme.

Teknik

Bahan

Nigrosine

Nigrosine berutang namanya pada warna hitam yang dimilikinya. Ini adalah zat sintetis yang diperoleh dari pemanasan campuran senyawa organik -seperti nitrobenzeine, anilin dan anilin hidrokorite -, menggunakan dalam reaksi itu katalis (besi atau tembaga).

Tinta Cina

Tinta Cina adalah zat yang digunakan terutama oleh orang Asia untuk menulis, elaborasi karya seni dan lukisan monokromatik. Itu sangat populer dalam budaya Cina.

Diperoleh dari tinta cumi yang dicampur dengan batubara bubuk, produk pembakaran pohon resin kecil.

Dimungkinkan juga untuk menyiapkannya dari jelaga pembakaran hidrokarbon (minyak nabati), bersama dengan jeli protein yang memberikan konsistensi yang tepat untuk menghindari presipitasi partikel batubara.

Spesifikasi untuk pengambilan sampel

• Itu tidak memerlukan puasa.
• Sampel sampel, sputum atau cairan steril harus mengandung setidaknya 1 ml volume dan harus ditransfer ke laboratorium pada suhu kamar.
• Sampel CSF dan cairan steril harus diambil oleh dokter khusus.
• Ini juga bisa menjadi tanaman murni dari strain mencurigakan yang terkait dengan patogen yang disebutkan di atas.

Eksekusi teknik dengan sampel langsung

• Sampel harus disentrifugasi, maka supernatan dibuang dan sedimen diambil.
• Setetes bahan yang disentrifugasi (sedimen) dan setetes tinta Cina atau nigrosin ditempatkan.
• Itu harus dicampur dengan baik dan penutup dengan penutup penutup, membiarkan drop memanjang seperti film yang bagus tanpa melebihi tepi.
• Selanjutnya, persiapan mikroskop dipasang.
• Jika persiapannya sangat gelap, dapat diencerkan dengan air.

Dapat melayani Anda: kemotropisme

Eksekusi teknik dengan strain dari budidaya

• Sebagian kecil dari tanaman muda diambil dengan jarum yang ditabur dan larut dalam setetes tinta Cina yang sebelumnya ditempatkan pada slide yang bersih.
• Penutup ditempatkan di atas.
• Itu diamati dalam mikroskop 10x dan kemudian pada 40x.

Anda juga dapat membubarkan sebagian koloni di air suling, dan dari sana mengambil setetes dan mencampurnya dengan tinta Cina. Dengan cara ini, persiapan tidak akan begitu tebal, memungkinkan pengamatan struktur secara terpisah. Jika ada aglomerasi, itu tidak akan diamati dengan baik.

Metodologi lain adalah sebagai berikut:

• Tempatkan setetes suspensi di salah satu ujung slide.
• Tempatkan setetes nigrosine di ujung yang sama dan aduk.
• Dengan bantuan slide lain, rentangkan sampel seolah -olah membuat noda hematologis.
• Biarkan kering dan amati di mikroskop.

Pengamatan mikroskop

Pertama harus difokuskan dengan target 10x untuk memiliki visi lapangan yang luas. Selanjutnya, Anda harus mencari jika ada ruang yang jelas. Jika ada, fokus dengan 40x untuk melihat detailnya.

Keuntungan

• Mudah dieksekusi.
• Itu adalah teknik ekonomi.
• Metode ini tidak mengharuskan noda diperbaiki untuk memanaskan atau dengan bahan kimia, oleh karena itu, mikroorganisme diamati tanpa distorsi.
• Persiapan fresco tidak perlu kering, sehingga dapat diamati segera, menghasilkan hasil dengan cepat.

Kerugian

• Setelah dipasang, persiapan baru harus segera diamati. Jika mereka diizinkan untuk mengeringkan, tidak mungkin lagi mengamanya dan yang baru.

Dapat melayani Anda: self -fertilisasi

Tinning tisu dengan tinta Cina

Fungsi lain yang dapat memenuhi tinta Cina adalah di laboratorium patologi. Ini diterapkan dalam sampel yang diekstraksi secara pembedahan dengan tujuan menandai margin reseksi tumor.

Jaringan yang ditandai disemprot dengan asam asetat. Ini bertindak sebagai mordan dan mencegah tinta keluar saat jaringan tunduk pada pemrosesan rutin untuk persiapan biopsi.

Prosedur ini terdiri dari memandikan kain dalam alkohol dan xylene, dan kemudian disematkan dalam lilin parafin. Penandaan ini memandu ahli patologi saat mengamati jaringan, menunjukkan di mana margin reseksi bedah atau titik menarik lainnya adalah.

Referensi

1. Nigrosine. Pulih dari es.Wikipedia.org.
2. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.KE.