Pewarnaan spora

Pewarnaan spora dengan metode shaeffer-fulton atau wirtz-conklin. Sumber: y juga (pengunggah asli) [GFDL (http: // www.gnu.Org/copyleft/fdl.html) atau cc-be-sa-3.0, Wikimedia Commons

Apa pewarnaan spora?

Itu Pewarnaan spora Ini adalah metodologi yang digunakan untuk mewarnai struktur resistensi yang membentuk beberapa genera bakteri saat mereka berada dalam kondisi yang tidak menguntungkan. Itu berfungsi untuk mengidentifikasi bakteri.

Ada banyak genre yang membentuk spora, namun, yang utama adalah Basil Dan Clostridium. Genre ini dianggap lebih relevan karena mereka memiliki spesies patogenik untuk manusia.

Setiap Bacillus dapat memunculkan spora. Pada saat mewarnai persiapan, spora dapat ditemukan di dalam bacillus (endospora) atau di luar ini (exospora). Dengan teknik pewarnaan konvensional untuk bakteri - seperti pewarnaan gram- spora tidak berwarna.

Saat ini ada beberapa metodologi pewarnaan yang mampu melintasi struktur tebal spora untuk mewarnai. Metodologi ini sangat bervariasi, dan teknik Dorner, pewarnaan Möeller dan metodologi shaeffer-fulton, juga dikenal sebagai wirtz-conklin dapat disebutkan.

Dari semua teknik yang disebutkan, metodologi Shaeffer-Fulton adalah yang paling banyak digunakan di laboratorium rutin. Berutang namanya untuk dua ahli mikrobiologi yang menciptakan warna pada tahun 1930: Alicia Shaeffer dan MacDonald Fulton. Namun, kadang-kadang teknik ini disebut wirtz-conklin untuk menghormati dua bakteriologi 1900.

Dasar

Spora tidak diwarnai dengan warna konvensional karena mereka memiliki dinding yang sangat tebal. Komposisi kompleks spora mencegah masuknya sebagian besar pewarna.

Jika spora di luar dipelajari ke dalam, lapisan berikut diamati: pertama, ada exosporium, yang merupakan lapisan terbaik dan paling eksternal yang dibentuk oleh glikoprotein.

Kemudian datang kutikula, yang memberikan resistensi terhadap suhu tinggi, diikuti oleh korteks yang terdiri dari peptidoglikan. Selanjutnya, ada pangkal pangkalan yang melindungi protoplast.

Spora adalah struktur dehidrasi yang mengandung 15% kalsium dan asam dipycolin. Oleh karena itu, sebagian besar spora teknik pewarnaan didasarkan pada aplikasi panas sehingga pewarna dapat menembus struktur yang tebal.

Dapat melayani Anda: laktogenesis: karakteristik dan tahapan

Setelah spora ternoda, itu tidak dapat menghilangkan pewarna. Dalam teknik Shaeffer-Fulton, hijau Malachite memasuki sel-sel vegetatif dan, dengan menerapkan panas, menembus endospora.

Saat mencuci dengan air, pewarna dikeluarkan dari sel vegetatif. Ini terjadi karena pewarna hijau Malachite sedikit mendasar, sehingga sel vegetatif mengikat dengan lemah.

Sebaliknya, Anda tidak bisa keluar dari spora dan akhirnya basil dengan safranin dipekerjakan. Yayasan ini berlaku untuk seluruh teknik, di mana sesuatu yang serupa terjadi.

Spora teknik warna

Untuk melakukan pewarnaan spora, Anda harus memiliki tanaman murni dari strain mencurigakan yang ingin Anda pelajari.

Tanaman mengalami suhu ekstrem selama 24 jam untuk merangsang mikroorganisme menjadi sporular. Untuk ini, tanaman dapat ditempatkan dalam 44 ° C atau di lemari es (8 ° C) selama 24 atau 48 jam.

Jika Anda meninggalkan terlalu lama pada suhu yang disebutkan di atas, hanya eksosos yang akan diamati, karena semua endospora akan meninggalkan Bacillus.

Waktu memuncak, beberapa tetes larutan fisiologis steril pada slide yang bersih harus ditempatkan. Kemudian sebagian kecil tanaman diambil dan denda yang diperpanjang. 

Selanjutnya, dibiarkan mengering, dipasang di panas dan pewarna dengan beberapa teknik yang dijelaskan di bawah ini:

Teknik Dorner

• Persiapkan dalam tabung reaksi suspensi terkonsentrasi dari mikroorganisme yang disporulasi dalam air suling dan tambahkan volume fenicada fuchsina yang sama dari Kinyoun yang disaring.
• Tempatkan tabung di kamar mandi dengan air mendidih selama antara 5 dan 10 menit.
• Pada slide yang bersih mencampur setetes suspensi sebelumnya dengan setetes larutan nigrosin berair pada 10%, direbus dan disaring.
• Perpanjang dan keringkan dengan api lembut.
• Periksa dengan target 100x (perendaman).

Spora adalah sel merah dan bakteri yang dicat tampak hampir tidak berwarna dengan latar belakang abu -abu gelap.

Dapat melayani Anda: helmintologi: asal, studi apa, contoh penelitian

Teknik Dorner yang dimodifikasi

• Sebuah suspensi yang diperpanjang dari mikroorganisme sporulasi dibuat pada slide dan diperbaiki untuk memanaskan.
• Sampel ditutupi dengan strip kertas filter yang ditambahkan fenicada fuchsin. Pewarna dipanaskan 5 hingga 7 menit dengan nyala api Bunsen yang lebih ringan sampai detasemen uap dihasilkan. Kemudian kertas ditarik.
• Persiapan dengan air dicuci dan kemudian dikeringkan dengan kertas penyerap.
• Noda ditutupi dengan film tipis nigrosine 10%, menggunakan slide kedua untuk memperpanjang nigrosine atau jarum.

Warna yang diambil oleh spora dan bakteri sama dengan yang dijelaskan dalam teknik sebelumnya.

Teknik Shaeffer-Fulton atau Wirtz-Conklin

• Buat denda yang diperpanjang dengan suspensi mikroorganisme sporulasi pada slide dan perbaiki panas.
• Tutupi slide dengan larutan malachite hijau berair pada 5% (kertas saring dapat ditempatkan di atas lembaran).
• Panaskan nyala api Bunsen sampai menyebabkan detasemen uap dan lepaskan nyala api. Ulangi operasi 6 hingga 10 menit. Jika selama prosedur, solusi hijau Malachite menguap, lebih banyak yang dapat ditambahkan.
• Lepaskan kertas saring (jika ditempatkan) dan cuci dengan air.
• Tutupi slide dengan safranin berair 0,5% selama 30 detik (beberapa varian teknik menggunakan safranin berair 0,1% dan tinggalkan selama 3 menit).

Dengan teknik ini spora disajikan hijau dan basil merah.

Ini memiliki ketidaknyamanan bahwa endospora tanaman muda tidak diwarnai dengan baik, karena mereka terlihat sangat jelas atau tidak berwarna. Untuk menghindari hal ini, disarankan untuk menggunakan tanaman inkubasi 48 jam.

Teknik Möeller

• Tutup noda dengan kloroform selama 2 menit.
• Buang kloroform.
• Tutup dengan asam kromi 5% selama 5 menit.
• Cuci dengan air suling.
• Lembaran dengan fuchsin-fenicada carbol tertutup dan terpapar pada nyala api Bunsen sampai emisi uap, kemudian dihilangkan dari nyala api beberapa saat. Operasi diulangi sampai 10 menit.
• Cuci dengan air.
• Gunakan etanol yang diasamkan (alkohol hidroklorik) untuk berubah warna. Itu dibiarkan selama 20 atau 30 detik.
• Cuci dengan air suling.
• Sewa menutupi lembaran dengan metilen biru selama 5 menit.
• Cuci dengan air suling.
• Dibiarkan mengering dan membawa sampel ke mikroskop.

Dapat melayani Anda: fenomena biologis

Spora terlihat merah dan basil biru. Penting untuk tidak bercita -cita untuk menguap, karena mereka beracun dan jangka panjang mereka bisa menjadi karsinogenik.

Teknik Möeller dimodifikasi tanpa panas

Pada tahun 2007, Hayama dan kolaboratornya menciptakan modifikasi teknik Möeller. Mereka menghilangkan pewarnaan pewarna dan menggantinya dengan penambahan 2 tetes tergitol 7 surfaktan untuk setiap 10 mL larutan karbol fuchsin yang ditiup. Hasil yang sama diperoleh.

Aplikasi

Warna spora memberikan informasi yang sangat berharga dan bermanfaat untuk identifikasi patogen, karena adanya hal yang sama, bentuknya, lokasi di dalam basil dan kemampuan untuk merusak sel vegetatif atau tidak, adalah data yang dapat memandu spesies menyala spesies yang terlibat dalam jenis kelamin tertentu.

Dalam konteks ini, ada baiknya mengatakan bahwa spora dapat bundar atau oval, mereka dapat ditempatkan di tengah atau juga di posisi palacentral, subterminal atau terminal.

Skema bentuk dan posisi endospora dan eksospore

Contoh

• Clostridium difficile Itu membentuk spora oval dalam posisi terminal yang merusak basil.
• Spora Clostridium Tertium Itu oval, tidak merusak basil dan terletak di tingkat terminal.
• Endospora dari Clostridium Tetani Itu adalah terminal dan merusak basil, memberikan penampilan tongkat drum.
• Spora Clostridium botulinum, C. histolyticum, C. Novy Dan C. Septicum Mereka bundar atau oval, bawah tanah dan merusak bacillus.
• Endospora dari Clostridium Sordelli Terletak di posisi tengah, dengan sedikit deformasi.

Referensi

1. Noda Moeller. Diterima dari.Wikipedia.org.
2. Endospora. Pulih dari es.Wikipedia.org.
3. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.KE.