Agar m.R.Apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Agar m.R.S. Ini adalah media kultur padat selektif, digunakan untuk isolasi dan penghitungan bakteri asam laktat, terutama genus Lactobacillus. Agar ini dibuat pada tahun 1960 oleh manusia, Rogosa dan Sharpe, membawa media dengan nama yang sama, tetapi karena kompleksitasnya singkatannya sering digunakan.R.S.

Ini terdiri dari protein pepton, ekstrak daging, ekstrak ragi, glukosa, sorbitan monoleato, dipbotassium fosfat, natrium asetat, amonium sitrat, magnesium sulfat, sulfat mangan dan agar mangan.

Han dan Sharpe Man Agar (m.R.S.) ditaburkan dengan Lactobacillus SP. Sumber: Foto yang disumbangkan untuk artikel ini oleh Penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto yang diambil selama penyelidikan berjudul: Evaluasi Bakteri Asam Laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi.

Komposisi ini memungkinkan perkembangan yang baik dari bakteri asam laktat dari sampel klinis, seperti tinja, sekresi vagina, sampel oral dan ASI, serta makanan susu dan makanan daging.

Ini tidak digunakan secara rutin di laboratorium klinis, karena bakteri asam laktat jarang terlibat dalam proses patologis. Namun, di area mikrobiologi makanan, penggunaan agar m lebih sering.R.S.

Di sisi lain, media ini digunakan oleh beberapa pusat penelitian yang tujuannya adalah studi tentang bakteri asam laktat.

Dasar

Pria, Rogosa dan Sharpe memiliki komposisi yang cukup kompleks. Dengan merobek fungsi yang dipenuhi masing -masing komponennya, Anda dapat menjelaskan fondasinya.

Protein pepton, ekstrak daging, ekstrak ragi dan glukosa, adalah nutrisi yang menyediakan sumber karbon, nitrogen, vitamin dan mineral yang diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Selain itu, glukosa adalah sumber energi universal yang digunakan di sebagian besar media budidaya.

Di sisi lain, untuk mendukung pertumbuhan bakteri asam laktat, adanya kofaktor yang sangat diperlukan (kation) diperlukan dalam metabolisme lactobacillus dan bakteri terkait; Senyawa ini adalah garam natrium, magnesium dan mangan.

Ini dapat melayani Anda: Opssonisasi: Apa itu, jenis, fungsi, molekul

Demikian juga, sorbitan atau polisorbat monoleoate 80 adalah sumber penting asam lemak saat diserap sebagai nutrisi.

Selain itu, ACT Monoleoate dan Ammonium Citrate Sorbitan yang menghambat perkembangan flora yang menyertainya, terutama bakteri negatif gram, memberikan karakter selektif dari agar ini.

Akhirnya, agar -agar adalah yang memberikan konsistensi yang kuat terhadap lingkungan.

Ada varian lain dari agar Rogosa Sharpe; Salah satunya adalah ditambah dengan sistein (m.R.S.c), sangat berguna untuk isolasi bifidobacteria, di antara mikroorganisme lainnya. Di sisi lain, ada MRS yang dilengkapi dengan neomisin, paromomisin, asam butiran dan lithium klorida, khusus untuk jumlah selektif bifidobacteria dalam produk susu.

Persiapan

Beratnya 68.25 gram media dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Diamkan selama 5 menit. Untuk larut secara keseluruhan mengarah ke sumber panas yang sering melambai dan mendidih selama 1 hingga 2 menit. Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Saat meninggalkan autoclave, diamkan selama beberapa menit dan distribusikan masih panas di piring steril petri.

Biarkan menguatkan dan menginvestasikan piring, pesan di trombosit dan simpan di lemari es sampai digunakan. Biarkan pelat mengambil suhu kamar sebelum menggunakannya.

PH medium harus 6,4 ± 0,2. Beberapa rumah komersial merekomendasikan pH antara 5,5 hingga 5,9.

Media dehidrasi adalah krem ​​dan disiapkan adalah amber gelap.

Kedua media dehidrasi dan pelat yang disiapkan harus disimpan dari 2 hingga 8 ° C.

Aplikasi

Piring agar m.R.S. Mereka dapat ditaburkan di permukaan (kelelahan atau dengan spatula drigalski). Itu juga bisa ditaburkan secara mendalam. Pelat harus diinkubasi pada suhu 37 ° C dalam mikroaerofilia (4% dari atau₂ dan 5-10% CO₂) Selama 24 hingga 72 jam.

Dapat melayani Anda: Amensalisme: Karakteristik, contoh, perbedaan dengan makan malam

Metode yang ditanam dipilih sesuai dengan tujuan yang dikejar (isolasi atau hitungan).

Karakteristik koloni

Koloni dugaan Lactobacillus tumbuh dengan warna keputihan dan memiliki penampilan mukoid atau krim dalam agar ini. Selanjutnya mereka harus mengidentifikasi.

Isolasi bakteri asam laktat

Untuk ini, permukaan yang ditabur digunakan. Sampel yang akan digugat memerlukan prosedur sebelumnya. 

Dalam kasus sampel ASI, disarankan untuk menyentrifus 1 mL sampel pada 14.000 RMP selama 10 menit, untuk menghilangkan lapisan lemak. 900 μl dibuang, dan dalam sisa 100 μl sedimen ditangguhkan dan permukaan agar m.R.S. Maka Anda harus mendistribusikan secara merata dengan spatula Drigalski.

Dalam kasus sampel tinja, satu (1) gram feses ditimbang dan 9 ml air pepton steril 0,1%dihomogenisasi, sesuai dengan pengenceran 1/10. Kemudian pengenceran serial dilakukan, sampai pengenceran akhir 10^-4.

Akhirnya 100 μl pengenceran 10 diambil^-2, 10^-3 dan 10^-4 Dan setiap pengenceran ditaburkan pada agar MRS, mendistribusikan secara merata dengan spatula Drigalski.

Jumlah bakteri asam laktat

Dalam hal ini ditabur dilakukan secara mendalam.

Untuk sampel ASI, 1 mL diambil dan ditempatkan dalam tabung plastik kerucut steril. Agar MRS ditambahkan pada suhu perkiraan 40 ° C ke volume akhir 25 mL, memperoleh campuran homogen. Selanjutnya dituangkan ke dalam petri steril.

Untuk sampel tinja, pengenceran dilakukan, seperti dijelaskan di atas. 1 ml setiap pengenceran diambil dan tabung plastik steril. MRS agar maste ditambahkan ke volume 25 mL.

Dapat melayani Anda: bioma air: karakteristik, jenis, flora, fauna, contoh

Campuran masing -masing pengenceran dituangkan secara seragam ke dalam piring steril petri. Akhirnya biarkan berdiri sampai polimerisasi Anda.

Koloni mengandalkan manusia dan agar -agar Sharpe (m.R.S.). Sumber: Foto yang disumbangkan untuk artikel ini. Penulis: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto yang diambil selama penyelidikan berjudul: Evaluasi Bakteri Asam Laktat dan Bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi.

Di tingkat penelitian

Setiap hari studi bakteri asam laktat menjadi lebih menarik; Terutama para peneliti berusaha mengetahui strain baru dan potensi mereka sebagai fermentasi inisiatif untuk standardisasi dalam pembuatan produk susu, di antara penggunaan lainnya.

Dalam hal ini, Alvarado et al. (2007) menggunakan agar m.R.S. Untuk melakukan penelitian di mana mereka mengisolasi, mengidentifikasi dan mengkarakterisasi bakteri asam laktat yang ada dalam keju artisanal Ahumado Andean.

Di keju mereka menemukan adanya bakteri genre lactococcus dan lactobacillus, dan menyimpulkan bahwa campuran strain yang terisolasi memadai sebagai strain inisiasi dalam pembuatan keju dari susu yang dipasteurisasi.

Di sisi lain, Sánchez y Cols. (2017) menggunakan agar m.R.S. Untuk menyelidiki keberadaan bakteri asam laktat dalam saluran pencernaan babi, untuk menggunakannya sebagai probiotik asli yang meningkatkan produktivitas babi sehat.

Dengan media ini mereka berhasil mengisolasi empat spesies: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae Dan Pediococcus pentosaceus.

Demikian juga, Báez et al. (2019) menggunakan penuaan m.R.S. Untuk mengevaluasi bakteri asam laktat (BAL) dan bifidobacteria dengan potensi probiotik dalam ASI dan kotoran bayi.

Mereka berhasil mengisolasi 11 bal dan 3 Bifidobacteria sp Dalam ASI, dan 8 bal dan 2 Bifidobacteria sp. Dalam tinja. Semua memenuhi parameter tertentu yang mengakreditasi mereka sebagai bakteri dengan aktivitas probiotik.

Para penulis menyimpulkan bahwa ASI dan tinja bayi menyusui secara eksklusif berfungsi sebagai sumber alami bakteri probiotik.

Qa

Untuk mengevaluasi kualitas agar m.R.S. Kontrol seperti:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli dan Bacillus cereus.

Hasil yang diharapkan adalah pertumbuhan yang memuaskan untuk 6 bakteri pertama, sedangkan DAN. coli Dan Bacillus cereus harus dihambat secara keseluruhan.

Referensi

1. Laboratorium Britania. M.R.Agar. Tersedia di: Britanialab.com