Neubauer Camera Riwayat, Karakteristik, Penggunaan

Itu Kamera Neubauer, Heatimeter atau Hechocytometer, adalah instrumen laboratorium yang terdiri dari plak kaca khusus. Ruang ini berfungsi untuk melakukan beberapa jenis sel seperti sel darah merah, sel darah putih dan trombosit, meskipun dapat digunakan untuk menghitung spora, sperma, parasit, dll.

Ini menyajikan karakteristik yang sangat aneh, karena terdiri dari 3 zona, pusat untuk penghitungan dan dua zona pendukung. Setiap kamera memiliki dua area penghitungan atau reticle, satu di bagian atas dan satu di bagian bawah.

Kamera Neubauer. Sumber: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/4.0)]. Gambar yang diedit.

Ini memiliki banyak divisi dalam bentuk kisi. Area penghitungan adalah kotak medium yang ditemukan di 4 sudut kedua reticle, ditambah kotak pusat.

Rakitan kamera harus dilakukan dengan sangat hati -hati, karena detail apa pun mempengaruhi jumlah sel. Ada banyak kesalahan yang dapat dilakukan, tetapi jika ada di antara mereka, kamera harus dibongkar, bersih dan kembali. Di antara kesalahan utama, berikut ini dapat disebutkan:

Rebosar kamera atau buat isian yang tidak mencukupi, biarkan kamera kering, cobalah untuk menghilangkan cairan berlebih dengan kain kasa, miringkan kamera dengan mengangkutnya, mengisi kamera yang kotor atau basah, tidak mencampur pengenceran atau sampel dengan baik, antara lain, antara lain. Semua kesalahan ini akan menghasilkan nilai yang tidak nyata.

[TOC]

Sejarah

Kamera Neubauer adalah instrumen presisi, dan dalam proses pembuatannya melewati kontrol kualitas yang ketat. Itu dibuat untuk partikel atau bentuk yang tepat oleh mm³, seperti sel dalam berbagai cairan. Grafiknya yang halus diukir dengan pensil berlian.

Karakteristik Kamar Neubauer

Kamera lengkap adalah ukuran slide normal sehingga dapat ditempatkan di pelat mikroskop.

Kamera terdiri dari tiga permukaan persegi panjang pusat (A, B, C). Di zona "b" zona r atau penghitungan berada, juga disebut retikulum. Satu di setiap sisi kamera, dipisahkan oleh zona "D".

Skema Grafis Kamera Neubauer. Sumber: Panduan Hematologi Praktis. Sekolah Bioanalisis Universitas Carabobo, Venezuela.

Setiap retikulum adalah area yang dipoles yang berisi area kontribusi yang diukir. Ini terdiri dari persegi dengan luas 9 mm² Dan secara internal dibagi menjadi 9 gambar dengan 1 mm² permukaan. Keempat sudut dibagi menjadi 16 kisi kecil (0.0625 mm² Permukaan).

Kisi -kisi ini dibentuk oleh serangkaian garis milimeter yang berpotongan satu sama lain, yang merupakan kisi -kisi grafis yang sempurna dan dibatasi pada langkah -langkah yang ditentukan. Garis -garis ini telah direkam dengan ujung berlian.

Peningkatan reticulum neubauer. Sumber: Panduan Hematologi Praktis dari Sekolah Bioanalisis Universitas Carabobo, Venezuela.

Keempat sisi sesuai dengan area penghitungan. Di sisi atau sudut ini adalah tempat akun sebagian besar sel (sel darah merah dan leukosit) dilakukan, sementara trombosit dihitung di area pusat.

Dapat melayani Anda: Malachite Green: Karakteristik, Persiapan, Aplikasi, Toksisitas

Zona pusat memiliki lebih banyak divisi, terdiri dari persegi 1 mm² dibagi menjadi 25 lukisan yang memiliki luas 0,04 mm² setiap. Ini pada gilirannya dibagi menjadi 16 grid dengan luas 0,0025 mm².

Deskripsi Retikulum Neubauer yang Ditingkatkan. a) kuadrat sudut, b) kotak tengah, c) persegi sedang dari kotak pusat. Sumber: Panduan Hematologi Praktis dari Sekolah Bioanalisis Universitas Carabobo, Venezuela.

Area "A" dan "C" berfungsi sebagai dukungan untuk menempatkan objek khusus yang disebut hematimetri lamella atau penutup hematimeter.

Tinggi antara lamella dan permukaan penghitungan adalah 0,1 mm. Ukuran permukaan kotak penghitungan, serta ketinggian kamera dan pengenceran sampel, adalah data yang diperlukan untuk melakukan perhitungan akhir.

Aplikasi

Ini digunakan untuk jumlah sel. Terutama sangat membantu di area hematologi, karena memungkinkan 3 seri sel darah dibuat; yaitu, sel darah merah, sel darah putih dan trombosit.

Namun, dapat digunakan di area lain, misalnya menghitung sperma, spora, bakteri atau elemen penting lainnya tergantung pada jenis sampel.

Bagaimana digunakan?

Persiapan sampel

Untuk melakukan jumlah sel, biasanya dimulai dari pengenceran sebelumnya. Contoh: Untuk menghitung sel darah putih, pengenceran 1:20 disiapkan dengan cairan Turk. Pengenceran dicampur dengan baik sebelum memuat pipet dan menyiapkan kamera neubauer.

Ada saat -saat saat pengenceran 1:20 tidak cukup untuk dihitung. Misalnya, pada pasien yang menderita jenis leukemia kronis tertentu. Dalam kasus ini, pengenceran yang lebih tinggi harus dibuat sebagai 1: 100.

Jika sebaliknya akunnya sangat rendah, seperti pada leukopenia parah, pengenceran yang lebih kecil dapat dibuat untuk memusatkan sampel. Contoh: Anda dapat melakukan pengenceran 1:10.

Perubahan yang dibuat mempengaruhi perhitungan.

Perakitan Kamar Neubauer

Kamar Neubauer dirakit dengan menempatkan lamella hematimetri di zona tengah. Keduanya harus sangat bersih dan kering. Untuk menempatkan lamella, itu diambil oleh tepi dan tetes dengan lembut di kamera.

Ini diisi dengan menempatkan ujung pipet otomatis atau pipet Thoma pada sudut 35 ° di tepi area kargo. Cairan dikeluarkan dengan lembut dan zona pemuatan diisi oleh kapilaritas. Ini dilakukan di kedua sisi untuk memuat kedua reticle.

Tidak ada reticle yang tidak boleh kelebihan beban dan cair tidak boleh ditolak. Beban harus tepat. Penting bahwa pengisian dilakukan secara homogen, yaitu, seharusnya tidak ada gelembung.

Setelah kamera diatur saat istirahat selama 2 menit agar sel -sel mengendap di latar belakang dan visualisasi serta penghitungannya lebih mudah.

Setelah waktu istirahat dipasang pada cahaya mikroskop cahaya untuk observasi. Pertama fokus dengan tujuan 10x dan jika perlu maka diteruskan ke 40x.

Dapat melayani Anda: anion celah

Untuk meningkatkan visualisasi Anda, lampu mikroskop berkurang. Untuk melakukan ini, kondensor diturunkan dan diafragma sedikit ditutup.

Akun

Untuk akun sel darah putih atau leukosit, seluruh permukaan empat kotak sedang dari sudut dan kuadrat sentral dari masing -masing reticulum harus dihitung.

Hitungan dimulai di kuadrat sudut kiri atas. Itu dimulai dari kuadrat pertama baris depan, yaitu, dari kiri ke kanan untuk mencapai ujung yang berlawanan.

Di sana diturunkan dan tampilan dikembalikan dari kanan ke kiri sampai mencapai ujung lainnya dan sebagainya di dalam setiap kisi dalam bentuk zigzag. 16 kisi -kisi setiap kuadrat sedang dihitung.

Untuk menghindari menghitung sel dua kali ada aturan pada sel yang terletak di garis yang berbatasan dengan setiap kisi. Sel -sel yang terletak di garis kiri dan atas dihitung dan yang terletak di garis kanan dan bawah diabaikan.

Penghitung sel manual harus tersedia sehingga operator menindas kunci perangkat sebanyak yang mengamati sel. Dengan penggunaan akuntan, operator dapat dihitung tanpa perlu melihat ke atas dari bidang mikroskopis. Di akhir akun Anda akan mengamati jumlah total sel yang dihitung.

Perhitungan

Untuk perhitungan, Anda dapat melanjutkan dengan beberapa cara. Anda dapat menghitung satu retikulum atau keduanya dapat dihitung dan rata -rata keduanya. Dalam dua situasi ini sel yang dihitung harus dikalikan dengan faktor, yang dalam kasus ini akan menjadi 40. Jadi jumlah total per mm diperoleh³.

Tetapi jika kedua reticle dihitung dan tidak ada rata -rata, itu harus dikalikan dengan faktor yang berbeda, dalam kasus ini dengan 20.

-Faktor multiplikasi

Selanjutnya, faktor multiplikasi dihitung.

Untuk perhitungan beberapa data dipertimbangkan, termasuk judul pengenceran, ketinggian ruang dan permukaan yang diceritakan.

Pengenceran

Pengenceran yang digunakan dengan cara standar adalah 1:20 untuk jumlah leukosit.

Tinggi ruang

Tinggi antara kamera dan lamina hematimetri adalah 0,1 mm.

Permukaan yang dihitung

Jika 5 kotak 1mm dihitung² permukaan, itu berarti bahwa total akun penghitungan adalah 5 mm². Data ini harus dikalikan dengan tinggi kamera untuk mendapatkan volume total yang diceritakan. Yaitu, 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Rumus dan perhitungan

Dengan data yang dikatakan, dikatakan:

Jika pada 0,5 mm³ -ada ° sel yang dihitung

Dalam 1 mm³ --akan ada - x jumlah sel

X sel n ° = (n ° sel yang dicaci x 1) /0,5 mm³

Tetapi pengenceran juga harus diperhitungkan. Oleh karena itu, formulanya adalah sebagai berikut:

(N ° sel yang dihitung x 1) x 20/0,5 mm³

Akhirnya, untuk meringkas Anda dapat melipatgandakan jumlah sel yang dihitung dengan 40. Dengan demikian nilai leukosit per mm diperoleh³.

Dapat melayani Anda: osmosis: proses, jenis, perbedaan dengan difusi dan contoh

Jika kedua reticle dihitung, data data diubah bahwa dalam hal ini akan menjadi 10 kotak, yaitu 10 mm². Dan volume total yang diceritakan tentang 1 mm3. Formulanya akan tetap:

(N ° sel dihitung x 1) x 20/1 mm³

Oleh karena itu, dalam hal ini faktor multiplikasi adalah 20.

Kesalahan

-Jika saat memuat kamera terlampaui atau terlampaui dengan cairan, ketinggian kamera akan bervariasi. Ini menghasilkan penghitungan yang nyata. Jika Anda mencoba menghilangkan kelebihan dengan kain kasa atau kapas, ini mewakili kesalahan Carafal. Tindakan ini akan membuat sel -sel berkonsentrasi, meningkatkan jumlah.

-Jika dibebankan dengan buruk, penghitungan akan di bawah nyata.

-Jika kamera dipasang dan dikeluarkan, tidak mungkin lagi untuk membuat hitungan karena akan menyiarkan hasil yang salah.

-Jika sebelum memuat kamera, pengenceran sampel tidak dicampur dengan baik, ada risiko kesalahan membaca, karena sel tidak akan didistribusikan secara homogen. Oleh karena itu, akan ada konsentrasi sel yang lebih sedikit atau lebih besar, tergantung pada apakah sampel diambil dari permukaan cairan atau bagian bawah tabung masing -masing.  

-Kehadiran gelembung mengurangi jumlah cairan yang harus memasuki reticle, mengganggu visualisasi dan distribusi sel yang benar. Semua ini secara signifikan mempengaruhi hasil.

-Selama hitungan, jangan angkat mikroskop sampai setiap kotak besar selesai untuk menghindari tersesat.

-Alasan kesalahan adalah untuk membungkuk kamera setelah dipasang. Oleh karena itu, Anda harus dengan hati -hati mengunggah pelat mikroskop.

Rekomendasi

Jika karena alasan tertentu Anda mendeteksi kelainan dalam pengarsipan kamera, paling disarankan agar Anda membongkar persiapan itu, bersihkan kamera dan menyusun kembali dari awal.

Berhati -hatilah saat membersihkan kamera untuk menghindari goresan reticles. Di sisi lain, perlu diingat bahwa lamel hematimetri halus dan rapuh. Manipulasi yang tidak memadai dapat merusaknya.

Sebelum mulai menghitung, pastikan sel -sel telah didistribusikan dengan baik. Distribusi sel yang tidak setara terjadi dengan campuran sampel atau pengenceran yang buruk. Jika ini terjadi, perakitan harus diulangi.

Cara mengetahui apakah sel -sel terdistribusi dengan baik adalah membandingkan akun masing -masing kuadrat besar, jumlah sel yang dihitung oleh setiap kuadrat tidak boleh dibedakan secara berlebihan antara satu dan yang lainnya.

-Jika sel darah putih lebih dari 50.000 mm³ Disarankan untuk mengulangi akun, membuat pengenceran yang lebih besar.

-Jika memodifikasi pengenceran, faktor multiplikasi harus menghitung lagi, karena ini mempengaruhi rumus.

Referensi

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Perbandingan Konsentrasi Sperma Menggunakan Kamera Makler dan Kamera Neubauer. UROL ESP 2008; 32 (4): 443-445. Tersedia di: Scielo.
2. Kamera Neubauer. (2018, 27 Maret). Wikipedia, ensiklopedia gratis. Tanggal Konsultasi: 04:10, 23 Juni 2019 dari ES.Wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Penerapan metode penghitungan alternatif di ruang Neubauer untuk menentukan konsentrasi vaginalis trichomonas. Putaran. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Tersedia di: ResearchGate.bersih
4. Gómez-Pérez Roald e. Analisis ekspermogram. Putaran. Venez. Endokrinol. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. Tersedia di: ve.Scielo
5. Panduan Hematologi Praktis Sekolah Bioanalisis Universitas Carabobo. Venezuela.1998