Setengah dari apa adanya, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Setengah saya Ini adalah tes biokimia yang digunakan untuk membantu identifikasi spesies bakteri yang termasuk dalam keluarga enterobakteriace. Ini cukup bergizi dan terdiri dari glukosa, ekstrak ragi, pepton, tripteine, l -ornitine hidroklorida, bromokres dan agar ungu.

Arti akronimnya (tambang) menggambarkan masing -masing parameter yang dapat diamati dalam media ini; Motilitas, indol dan ornitine. Motilitas adalah kemampuan mikroorganisme untuk bergerak di sekitar kehadiran flagella. Agar properti ini diamati, konsistensi media harus semi -solid, sehingga persiapan membawa jumlah agar lebih sedikit.

Skema Interpretasi Hasil di Tambang Menengah. Sumber: Disiapkan oleh Penulis MSC. Marielsa Gil

Produksi Indol Bukti keberadaan enzim triptofanasa yang bertindak pada asam amino triptofan, yang diperlukan untuk menggunakan reagen yang mengungkapkan untuk membuat produksi indole yang terlihat.

Akhirnya, ornithine menentukan apakah bakteri mampu melakukan dekarboxillary.

Dasar

Pepton, ekstrak ragi dan triptein

Elemen -elemen ini berkontribusi pada kekuatan nutrisi dari media ini. Mereka berfungsi sebagai sumber nutrisi penting dan asam amino untuk pengembangan bakteri.

Selain itu, Triptein adalah sumber triptofan untuk menunjukkan keberadaan enzim triptofanasa, yang menurunkan triptofan yang jatuh tempo.

Indol tidak berwarna, oleh karena itu kehadirannya diungkapkan dengan menambahkan lima tetes reagen Ehrlich atau Kovacs, keduanya dengan p-dimethylaminobenzaldehyde.

Kelompok aldehida dari senyawa ini bereaksi dengan indol, menghasilkan produk berbentuk fuchsia merah pada permukaan agar.

Sisa -sisa warna harus dianggap sebagai tes positif. Tes harus segera dibaca, karena waktu warnanya menurun.

Di sisi lain, tes ini harus diungkapkan setelah mencatat hasil motilitas dan dekarboksilasi ornithine.

Dapat melayani Anda: tulang ringkas: karakteristik, struktur, fungsi

Penafsiran

Tes positif: Formasi cincin merah fuchsia saat menambahkan tetes reagen Kovacs.

Tes negatif: Tidak ada formasi cincin.

Motilitas

Kapasitas bakteri untuk bergerak akan menjadi bukti.

Tes motilitas negatif akan dibuktikan dengan mengamati garis pertumbuhan yang tipis, dan segala sesuatu di sekitarnya akan tanpa pertumbuhan.

Penting bahwa motilitas dibaca sebelum diungkapkan.

Pada bakteri bergerak tetapi pertumbuhan yang lambat sulit untuk menunjukkan motilitasnya dengan media ini. Dalam hal ini disarankan untuk menggunakan tes atau metode lain, seperti motilitas menengah atau metode drop yang tertunda.

Glukosa

Glukosa adalah karbohidrat yang dapat difermentasi yang selain memberikan pengasaman energi pada media, kondisi yang diperlukan sehingga dekarboksilasi asam amino ornithine dapat terjadi.

Fermentasi glukosa harus selalu terjadi, berdasarkan prinsip bahwa semua bakteri milik keluarga Enterobacteriaceae memfermentasi glukosa.

L -Ornitin

Dalam hal bakteri menghasilkan enzim ornitin dekarboksilase, ia dapat bertindak begitu media diasamkan dengan fermentasi glukosa.

Enzim ornithine dekarboksilase bekerja pada gugus karboksil asam amino yang menghasilkan amina yang disebut putresina yang menggantikan media lagi.

Tes ini harus dibaca setelah 24 jam inkubasi, karena jika Anda mencoba membaca sebelum Anda dapat salah memahami tes dengan negatif palsu.

Ingatlah bahwa reaksi pertama yang terjadi adalah fermentasi glukosa, sehingga media menjadi kuning dalam fase awal (10 hingga 12 jam pertama). Jika dekarboksilasi ornithin terjadi nanti, media akan berubah ungu.

Penting untuk menafsirkan uji dekarboksilasi ornithine sebelum mengungkapkan indole, karena agregat reagen Kovac memodifikasi warna medium.

Dapat melayani Anda: kerajaan alam dan karakteristiknya

Penafsiran

Tes negatif: media kuning atau kuning.

Tes positif: Separuh yang benar -benar ungu.

Indikator pH

Dalam hal ini, bromocresol ungu digunakan; orang yang bertugas mengungkapkan ketika ada perubahan pH di tengah. Dengan mengasamkan, indikator berubah menjadi kuning, dan ketika alkalinari dia berubah ungu.

Menaburkan dan mengungkapkan teknik

Untuk menabur media saya, lurus atau jarum digunakan dan sebagian koloni untuk dipelajari dikumpulkan dengannya.

Tusukan yang dalam dibuat di tengah saya di garis lurus. Itu tidak disarankan.

Inkubasi selama 24 hingga 48 jam pada suhu 37 ° C dalam aerobiosis. Amati hasil dalam urutan ini: motilitas, dekarboksilasi ornithine dan akhirnya mengungkapkan indole.

Dianjurkan untuk mengambil 2 ml ke medium, mentransfernya ke tabung steril dan melakukan uji indole di sana, jadi jika memberikan negatif, sisa tabung asli dapat diinkubasi selama 24 jam lebih, untuk mengungkapkan indole lagi.

Pengembangan indol dilakukan sebagai berikut: 3 hingga 5 tetes reagen Kovacs ditambahkan di lingkungan saya dan sangat kuat. Diamati apakah cincin merah fuchsia muncul atau tidak.

Persiapan

Setengah saya

Beratnya 31 gr dari lingkungan saya dan larut dalam satu liter air suling.

Panaskan sampai campuran mendidih selama satu menit, sering diaduk sampai Anda melarutkan agar. Distribusikan 4 ml medium dalam tabung reaksi 13/100 dengan tutup kapas.

Sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Hapus dari autoclave dan diamkan lurus dalam kejutan, sehingga taco semi -solid terbentuk.

Simpan di lemari es 2-8 ° C. Biarkan marah sebelum menabur regangan bakteri.

Warna media dehidrasi adalah krem ​​dan medium disiapkan ungu sedikit opalescent.

Itu dapat melayani Anda: Evolusi Divergent: Penyebab dan Contoh

PH akhir dari media yang disiapkan adalah 6,5 ± 0.2

Media menjadi kuning dengan pH asam dan ungu ke pH basa.

Kovacs Reaktif (Pengembang Tes Indol)

Reagen ini disiapkan sebagai berikut:

150 ml amil, isoamil atau alkohol butil diukur (salah satu dari ketiganya). 10 gr dari p-dimethylaminobenzaldehyde larut di dalamnya. Selanjutnya, 50 mL asam klorida terkonsentrasi secara perlahan ditambahkan.

Reagen yang disiapkan tidak berwarna atau kuning jernih. Itu harus disimpan dalam botol kuning dan diawetkan di lemari es. Warna coklat gelap menunjukkan kerusakannya.

Juga reagen Kovacs dapat digantikan oleh reagen Ehrlich. Yang terakhir, karena lebih sensitif, lebih disukai untuk mengungkapkan indol dalam bakteri yang memproduksinya dalam jumlah minimal, seperti pada beberapa basil negatif yang tidak memusatkan dan anaerob tertentu.

Menggunakan

Media ini adalah tes yang melengkapi baterai tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang termasuk dalam keluarga Enterobacteriace.

Data dekarboksilasi ornithin berfungsi untuk membedakan Shigella Sonnei, yang memberi positif, OF Shigella Boydii, Shigella Flexneri dan S. Dysenterieae, Mereka memberi negatif.

Ini juga membedakan genus Klebsiella, yang memberikan negatif, dari genus Enterobacter, di mana sebagian besar spesiesnya memberikan positif.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.

Qa

Setiap kali setengah dari saya disiapkan, tes kontrol dapat dilakukan. Untuk ini, strain yang diketahui atau bersertifikat digunakan untuk mengamati perilaku medium.

Strain yang dapat digunakan Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes Dan Proteus mirabilis.

Hasil yang diharapkan adalah DAN. coli dan m. Morganii. Dan M: +, i: + dan o: +.

Klebsiella pneumoniae Berikan semuanya negatif (m:-, i:-, o :-). Proteus mirabilis Dan Enterobacter aerogenes Dan M:+ I:- dan o: +.

Referensi

1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri pentingnya klinis. Edisi ke -3. Editorial Pan -American. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.