Voges-Proskauer Test Apa itu, fondasi, persiapan, penggunaan

Dia Tes Voges-Proskauer Ini adalah tes biokimia yang digunakan untuk membantu identifikasi bakteri milik keluarga Enterobacteriaceae. Terutama berguna untuk membedakan strain dari Escherichia coli dari Klebsiella dan Enterobacter, di antara yang lain.

Tes ini dilakukan dalam media kultur cair yang disebut Methyl-Voges Proskauer, lebih dikenal dengan akronim RM/VP. Media ini terdiri dari polipepton buffered, glukosa, dipotassium fosfat dan air suling.

Metil Merah Metilo-Voges Proskauer (RM/ VP)/ Tes VP Positif dan Negatif. Sumber: Foto diambil oleh penulis MSC. Marielsa Gil/ Sudipta.Nov15 [CC BY-SA 3.0 (https: // createveCommons.Org/lisensi/by-sa/3.0)], dari Wikimedia Commons

Media RM/VP saat ini adalah modifikasi dari media Clark dan Lubs, yang awalnya mengandung lebih sedikit konsentrasi pepton dan glukosa. Oleh karena itu, ada lebih sedikit ion hidrogen, diperlukan untuk reaksi positif voges-proskauer.

Tes ini didasarkan pada kapasitas mikroorganisme menggunakan glukosa oleh rute butilén-glikolik, dan membentuk produk akhir netral yang disebut acetoine, di hadapan oksigen dan pH alkali alkali.

Dalam media RM/VP, selain dapat mengungkapkan uji Voges-Proskauer, Anda juga dapat mengungkapkan tes merah Metilian.

Dasar

Foundation of the Voges-Proskauer Test

Pluripepton yang ada di tengah memberikan kebutuhan nutrisi yang sangat diperlukan untuk pertumbuhan bakteri. Untuk bagiannya, glukosa adalah senyawa utama. Banyak bakteri memiliki kemampuan untuk memetabolisme glukosa dan membentuk asam piruvat.

Asam piruvat adalah titik tengah dalam metabolisme glukosa dan dari sana setiap mikroorganisme dapat mengambil jalur yang berbeda. Beberapa akan membentuk asam campuran, seperti asam laktat, asam asetat, asam format dan asam suksinat, dan yang lainnya akan membentuk produk netral seperti 2,3-butnediol.

Itu bisa melayani Anda: flora dan fauna dari Mexico City

Tes Voges-Proskauer mengungkapkan kapasitas mikroorganisme membentuk asetil metil karbinol (asetoine), produk perantara 2,3-butnediol dalam kondisi aerobiosis.

Asetoine berkurang dan bentuk 2,3-butnediol, tetapi reaksi ini dapat dibalik, oleh karena itu jika 2,3-butnediol teroksidasi. Oleh karena itu, oksigen sangat diperlukan.

Dipotassium fosfat adalah buffer yang bantalan campuran hingga pH 6,9 ± 0,2.

Landasan Pengembangan Bukti dan Interpretasi

Untuk menunjukkan reaksinya, wahyu harus dilakukan dengan menggunakan dua reagen (reagen barrit), yang dikenal sebagai voges A dan voges b.

Voges A adalah larutan α-naftol 5%, dan Voges B adalah persiapan kalium hidroksida 40%. Jika kalium hidroksida tidak tersedia, ia dapat diganti dengan 40% natrium hidroksida.

Α-naftol adalah katalis yang akan meningkatkan intensitas warna reaksi, yang membuat uji yang paling sensitif. Α-naftol harus selalu ditambahkan terlebih dahulu, mengaduk tabung sehingga medium masuk ke dalam kontak dengan oksigen. Dengan cara ini asetoine saat ini dioksidasi menjadi diasetil, dan 2,3-butnediol dioksidasi untuk membentuk asetoine, meneruskannya ke diacetyl.

Beginilah cara α-naftol akan bergabung dengan diacetyl, yang pada gilirannya telah bergabung dengan nukleus guanidin yang ada dalam asam amino arginin, yang terakhir dari multipartones.

Untuk bagiannya, kalium atau natrium hidroksida bertanggung jawab untuk menyerap CO₂ Dan bereaksi dengan Peptones. Reaksi ini berasal dari pembentukan warna salmon merah muda, terlihat jelas setelah mengaduk tabung dengan sangat baik.

Dapat melayani Anda: Tingkat Organisasi Jaringan: Karakteristik dan Contoh

Agar pewarnaan terjadi secara instan, jumlah diacetyl, pepton, dan α-naftol yang benar harus dicampur. Jika ini tidak terjadi, tabung dibiarkan beristirahat selama 15 menit sebelum menafsirkan.

Tes umumnya positif setelah 2 hingga 5 menit, ketika Anda dapat melihat warna merah muda yang lemah. Jika dibiarkan istirahat selama 30 menit pada 1 jam intensitas warna akan maksimal (merah intens).

Tes negatif akan dibuktikan saat kaldu berwarna kuning. Setelah 1 jam, jika tesnya negatif, produk warna tembaga dari reaksi kalium hidroksida pada α-naftol dapat dibentuk.

Persiapan

RM/VP tengah

Berat 17 gr dari kultur dehidrasi dan larut dalam satu liter air suling. Diamkan selama 5 menit. Panaskan hingga mendidih untuk larut sepenuhnya. Sajikan 3 hingga 4 mL dalam tabung dan sterilisasi dalam autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit.

Media kultur dehidrasi adalah krem ​​dan media yang disiapkan adalah kuning ringan.

PH akhir medium adalah 6,9 ± 0,2.

Reagen voges a

Berat 5 gr dari α-naftol dan larut dalam 50 mL etil alkohol (absolut). Selanjutnya, menambahkan etil alkohol bahkan Enrasar pada 100 mL.

Reagen Voges b

Berat 40 gr dari kalium hidroksida dan larut dalam 50 ml air suling dalam gelas kimia. Kaca harus ditempatkan di bak air dingin untuk mengontrol suhu, karena pada saat melarutkan persiapan, naiknya suhu tajam.

Setelah larutan dingin, ditransfer ke bola cincang dan flush pada 100 mL dengan air suling.

Itu bisa melayani Anda: agar darah

Prosedur uji Voges-Proskauer

Untuk melakukan uji Voges-Proskauer, kaldu RM/VP diinokulasi dengan mikroorganisme yang diteliti, dari tanaman murni dari 18 hingga 24 jam.

Inokulum seharusnya tidak terlalu padat. 35-37 ° C adalah incuba selama 24 hingga 48 jam, meskipun inkubasi selama beberapa hari kadang-kadang diperlukan. Cowan dan Steel percaya bahwa 5 hari adalah waktu inkubasi minimum yang diperlukan untuk mendeteksi semua spesies positif voges-proskauer (VP) dari keluarga enterobacteriae.

Tes terungkap

Pisahkan alikuot 1 mL dalam tabung dan buat pengembangan sebagai berikut: Tempatkan 12 tetes (0,6 mL) dari voges A dan 4 tetes (0,2 mL) dari voge B. Aduk ke udara dan diamkan 5 - 10 menit sebelum menafsirkan. Namun, jika tes masih negatif, diamkan dan amati tabung setelah 30 menit hingga 1 jam.

Penampilan warna merah merah muda menunjukkan bahwa reaksi voges-proskauer positif. Jika medium tetap kuning, reaksinya negatif.

Penambahan pengungkapan dalam urutan dan kuantitas yang ditunjukkan sangat penting untuk menghindari negatif palsu.

Menggunakan

Tes Voges-Proskauer berguna untuk membedakan antara strain dari DAN. coli yang merupakan VP negatif, dari genre Klebsiella, Enterobacter, Serratia, antara lain, yang merupakan VP positif.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis mikrobiologis. Edisi ke -5. Pan -American Editorial S.KE. Argentina.

Qa

Untuk menguji kualitas media yang disiapkan, Anda dapat menggunakan kontrol kontrol, termasuk Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium dan Sewer Enterobacter ATCC 13047.

Hasil yang diharapkan adalah reaksi voges-proskauer positif hanya untuk K. pneumoniae Dan DAN. Cloacae. Sisanya memberikan reaksi negatif.

Referensi

1. Laboratorium Britania. Rata-rata MR-VP. Tersedia di: www.Britaniaalab.com