Pewarnaan Giemsa

Pewarnaan Giemsa adalah metode umum untuk memeriksa berbagai jaringan dan sampel darah

Apa pewarnaan Giemsa?

Itu Pewarnaan Giemsa Ini adalah jenis sampel klinis (jaringan, darah), berdasarkan campuran asam dan pewarna basa. Ini menciptakan Gustav Giemsa, ahli kimia Jerman dan ahli bakteriologi, yang menyempurnakan karya Romanowsky dengan menambahkan gliserol untuk menstabilkan senyawa.

Perubahan yang dihasilkan pada teknik Romanowsky asli memungkinkan untuk secara signifikan meningkatkan pengamatan mikroskopis, oleh karena itu, teknik ini dibaptis dengan nama pewarnaan Giemsa.

Menjadi teknik sederhana untuk dilakukan, dengan fungsionalabilitas dan ekonomi yang luar biasa, saat ini banyak digunakan di laboratorium klinis untuk aroma hematologis, sampel sumsum tulang dan pemotongan jaringan.

Teknik pewarnaan Giemsa sangat berguna untuk studi sitologis, karena memungkinkan pengamatan struktur sel tertentu. Teknik ini menodai sitoplasma, inti, nukleolo, vakuola dan butiran sel, bahkan membedakan jejak kromatin halus.

Selain itu, perubahan signifikan dalam ukuran, bentuk atau warna nukleus dapat dideteksi, jika dimungkinkan.

Fondasi pewarnaan Giemsa

Pewarna tipe Romanowsky memiliki kontras dasar antara pewarna asam dan basa, untuk membunuh struktur basa dan asam, masing -masing. Seperti yang dapat dilihat, ada afinitas pewarna asam mewarnai struktur dasar dan sebaliknya.

Pewarna dasar yang digunakan adalah metilen biru dan turunannya yang berkarat (Azure A dan Azure B), sedangkan pewarna asam adalah eosin.

Struktur asam sel adalah asam nukleat, butiran basofilik tersegmentasi, antara lain. Oleh karena itu, mereka akan diwarnai dengan metilen biru.

Dalam pengertian yang sama, struktur dasar sel adalah hemoglobin dan beberapa butiran, seperti isi dalam eosinofil yang tersegmentasi, antara lain. Ini akan diwarnai dengan eosina.

Di sisi lain, karena metilen dan biru biru ditandai dengan pewarna metakromatik, mereka dapat memberikan nada variabel pada struktur yang berbeda, sesuai dengan beban poliianon yang mereka miliki.

Inilah bagaimana kombinasi strategis pewarna dasar dan asam mengelola untuk mengembangkan spektrum warna yang luas, sesuai dengan karakteristik biokimia dari masing -masing struktur, berjalan melalui biru pucat, biru tua, lilac dan warna biru ungu, dalam kasus struktur asam asam asam asam.

Warna yang disediakan oleh Eosina lebih stabil, menghasilkan warna antara kemerahan, oranye dan salmon.

Bahan

Persiapan Solusi Ibu

Persiapan larutan ibu membutuhkan berat 600 mg debu giemsa, berukuran 500 cc alkohol metilolik bebas aseton dan 50 cc gliserin netral.

Mode persiapan

Tempatkan debu giessa yang berat di atas mortir. Jika ada benjolan, mereka harus dihancurkan. Selanjutnya, tambahkan sejumlah besar gliserin yang diukur dan aduk rata. Campuran yang diperoleh dituangkan ke dalam botol kuning yang sangat bersih.

Gliserin lainnya ditempatkan di mortir. Aduk lagi untuk membersihkan sisa pewarna yang telah menempel di dinding mortir dan melemparkan botol yang sama.

Dapat melayani Anda: Conidia

Botol tertutup dan membutuhkan waktu 2 jam dalam penangas air pada suhu 55 ° C. Selama.

Selanjutnya, campuran dibiarkan dingin untuk menempatkan alkohol. Sebelumnya, bagian dari alkohol yang diukur ditempatkan di mortar untuk menyelesaikan mencuci apa yang diwarnai dan kemudian ditambahkan ke dalam campuran, di sebelah alkohol lainnya.

Persiapan ini harus dibiarkan matang setidaknya selama 2 minggu. Porsi yang digunakan dari solusi ibu harus disaring.

Untuk menghindari kontaminasi persiapan, disarankan untuk melewati porsi yang akan terus digunakan untuk botol kuning kecil dengan dripper. Reracharge setiap kali reagen habis.

Persiapan solusi buffer

Di sisi lain, solusi buffer pH 7,2 disiapkan sebagai berikut:

6,77 gr natrium fosfat (anhidrat) (nahpo ditimbang₄), 2,59 gr dari kalium dihidrogen fosfat (KH₂PO₄) dan air suling hingga 1.000 cc.

Persiapan mewarnai terakhir

Untuk persiapan larutan pewarnaan akhir, 2 cc dari larutan ibu yang disaring diukur dan dicampur dengan 6 cc larutan buffer. Campuran diaduk.

Fakta yang relevan yang harus diperhitungkan adalah bahwa teknik persiapan pewarna dapat berubah sesuai dengan rumah komersial.

Bahan tambahan yang diperlukan untuk melakukan warna

Terlepas dari bahan yang dijelaskan, jembatan pewarnaan, tapak dengan air atau buffer untuk dicuci, irisan geser atau penutup, stopwatch, stopwatch untuk mengontrol waktu pewarnaan dan kertas pengeringan atau beberapa bahan yang berfungsi untuk mengering (kasa atau kapas (kasa atau kapas).

Teknik

Proses pewarnaan

1. Sebelum mewarnai, sampel yang diperluas pada slide yang bersih harus siap.

Sampel bisa berupa darah, sumsum tulang, jaringan histologis atau sampel serviks-vaginal. Disarankan agar yang diperpanjang baik -baik saja dan memiliki 1 atau 2 jam pengeringan sebelum mewarnai mereka.

2. Di jembatan pewarnaan ditempatkan semua lembar yang diwarnai. Itu selalu berfungsi dalam urutan yang sama dan setiap lembar diidentifikasi dengan baik.

3. Tempatkan beberapa tetes alkohol logam 100% (metanol) pada bau dan berangkat selama 3 hingga 5 menit, untuk memperbaiki dan mendehidrasi sampel.

4. Buang metanol yang ada di lembaran dan biarkan mengering di udara.

5. Setelah kering, tempatkan larutan pewarnaan akhir dengan penetes sampai menutupi seluruh lembar. Tinggalkan tindakan selama 15 menit. Beberapa penulis merekomendasikan hingga 25 menit. Itu tergantung pada rumah komersial.

6. Kuras pewarna dan cuci gosok dengan air suling atau dengan larutan buffer 7.2.

7. Di atas kertas pengeringan, biarkan lembaran luar kering, disusun secara vertikal dengan bantuan dukungan.

Dapat melayani Anda: renina: struktur, produksi, sekresi, fungsi

8. Bersihkan bagian belakang slide dengan kain kasa atau kapas dibasahi alkohol untuk menghilangkan sisa pewarna.

Penggunaan/Aplikasi Pewarnaan Giemsa

Teknik pewarnaan Giemsa digunakan di berbagai bidang: dalam hematologi, mikologi, bakteriologi, parasitologi, sitologi dan sitogenetika.

Hematologi

Ini adalah penggunaan yang paling sering diberikan untuk pewarnaan ini. Dengan itu, masing -masing dan setiap sel yang ada dalam sampel sumsum tulang atau darah tepi diidentifikasi. Serta menghitung jumlah masing -masing seri, mampu mendeteksi leukositosis atau leukopenia, trombositopenia, dll.

Karena sensitif untuk mengidentifikasi sel -sel yang belum matang, itu relevan dalam diagnosis leukemia akut atau kronis. Dimungkinkan juga untuk membuat diagnosis anemia, seperti drepanocytic, anemia falciform, antara lain.

Ilmu jamur

Di daerah ini penggunaannya umum untuk pencarian Histoplasma capsulatum (jamur dimorfik intraseluler) dalam sampel jaringan.

Bakteriologi

Dalam noda hematologis diwarnai dengan Giemsa, dimungkinkan untuk mendeteksi Borrelias sp Pada pasien yang mempelajari penyakit ini disebut Recurrentis Fever. Spiroquettes diamati berlimpah di antara eritrosit, dalam sampel yang diambil di puncaknya.

Juga dimungkinkan untuk memvisualisasikan bakteri intraseluler seperti Rickettsias sp Dan Chlamydia trachomatis Dalam sel yang terinfeksi.

parasitologi

Di bidang parasitologi, pewarnaan Giemsa telah memungkinkan diagnosis penyakit parasit, seperti malaria, kejahatan chagas dan leishmaniasis.

Di dua yang pertama, parasit Plasmodium sp dan Cruzi Tripaosoma, masing -masing, mereka dapat divisualisasikan dalam darah perifer dari pasien yang terinfeksi. Mereka dapat ditemukan dalam berbagai tahap sesuai dengan fase di mana penyakitnya.

Untuk meningkatkan pencarian parasit darah, disarankan.

Demikian juga, leishmaniasis kulit dapat didiagnosis saat mengevaluasi sampel biopsi kulit yang diwarnai dengan Giemsa, di mana parasit ditemukan.

Sitologi

Pewarnaan Giemsa juga digunakan untuk studi sitologis sampel endoserviks, meskipun bukan teknik yang paling sering digunakan untuk tujuan ini.

Tetapi dalam kasus kelangkaan sumber daya, dapat digunakan, memiliki fungsionalabilitas yang mirip dengan yang ditawarkan oleh Danau Pap dan biaya yang lebih rendah. Namun, itu membutuhkan keahlian oleh penguji.

Sitogenetika

Karakteristik yang relevan dari pewarnaan Giemsa adalah kemampuannya untuk sangat bergabung dengan daerah yang kaya akan adenin dan timinas DNA. Ini memungkinkan DNA untuk divisualisasikan selama sel myitosis, di keadaan kondensasi yang berbeda.

Studi -studi ini diperlukan untuk mendeteksi penyimpangan kromatik, seperti duplikasi, penghapusan atau translokasi dari berbagai daerah kromosom.

Pewarnaan Giemsa. Sumber: PanReac Applichem ITW Reagents. Versi 2: jmbjul17 ceivd10es. Castellar del Vallés, Spanyol.

Rekomendasi untuk pewarnaan yang baik

- Pengeringan lembaran tidak boleh dipercepat. Waktu kehati -hatian untuk pengeringan itu harus diharapkan di luar ruangan. Sekitar 2 jam.

Dapat melayani Anda: timina

- Mewarnai segera setelah 2 jam untuk hasil yang lebih baik.

- Agar bau diperbaiki dan dicelup lebih baik, sampel harus didistribusikan pada lembaran sehingga ada lapisan yang tipis dan seragam.

- Sampel darah yang disukai adalah kapiler, karena smere.

- Jika darah vena digunakan, EDTA harus digunakan sebagai antikoagulan dan bukan heparin, karena yang terakhir biasanya merusak sel.

Kesalahan umum dalam warna Giemsa

Dalam praktik pewarnaan ini Anda dapat membuat kesalahan. Mereka dibuktikan dengan perubahan mendadak dalam nada struktur.

Warna yang sangat biru

Mungkin karena:

- Noda sangat tebal.

- Melebihi waktu noda.

- Cuci tidak cukup.

- Penggunaan reagen jauh di atas pH netral (alkali).

Dalam kondisi ini, warna-warna struktur berikut terdistorsi, sedemikian rupa sehingga eritrosit, bukannya mewarnai garam mawar, n akan berwarna hijau, butiran eosinofil yang harus diwarnai dengan bata merah akan menjadi kebiruan atau abu-abu atau abu -abu, dan seterusnya akan ada penyimpangan dalam warna yang biasa.

Warna pink berlebihan

Mungkin karena:

- Waktu pewarnaan yang tidak mencukupi.

- Cuci yang berkepanjangan atau berlebihan.

- Kurang mengering.

- Penggunaan reagen yang sangat asam.

Dalam kasus khusus ini, struktur yang biasanya diwarnai dengan warna biru tidak akan hampir terlihat, sedangkan struktur yang dicelup karena mawar akan memiliki nada yang sangat berlebihan.

Contoh: Erythrocytes akan mengambil warna merah cerah atau oranye yang kuat, kromatin nuklir akan terlihat pucat pucat dan butiran eosinofilik akan diwarnai dari cerah merah cerah terang cerah.

Adanya endapan dalam noda

Penyebabnya bisa:

- Gunakan irisan kotor atau buruk.

- Jangan biarkan noda kering.

- Tinggalkan solusi perbaikan terlalu lama.

- Mencuci yang tidak memadai di akhir pewarnaan.

- Filtrasi yang tidak memadai atau non -filtrasi pewarna yang sedang digunakan.

Adanya artefak morfologis

Dalam apusan, artefak morfologis dapat muncul yang menghambat visualisasi dan interpretasi struktur yang ada. Hal ini disebabkan:

- Jenis antikoagulan yang digunakan, seperti heparin.

- Penggunaan lembaran kotor, memburuk, atau berminyak.

Mode penyimpanan

Setelah disiapkan, pewarna harus dipertahankan pada suhu kamar (15-25 ° C), untuk mencegah pewarna mengendapkan. Itu harus disimpan dalam wadah kuning yang ditutup dengan baik.

Referensi

1. Cannova, d., Brito, e. Dan Simons, m. (2016). Evaluasi teknik pewarnaan untuk diagnosis leishmaniasis kulit. Salus. 
2. PanReac Applichem ITW Reagnts. Pewarnaan Giemsa. Versi 2: jmbjul17 ceivd10es. Castellar del Vallés, Spanyol.
3. Clark, g. Prosedur Pewarnaan (1981). Williams & Willkins.