biologi

Pewarnaan Kinyoun

Pewarnaan Kinyoun
Cryptosporidium parvum diwarnai dengan pewarnaan Kinyoun. Sumber: Punlop Anusonpornperm, Wiikimedia Commons

Apa pewarnaan Kinyoun?

Itu Pewarnaan Kinyoun Ini adalah teknik pewarnaan yang digunakan untuk mewarnai bakteri dan parasit yang tahan asam -alkohol. Ia dilahirkan dari modifikasi warna Ziehl-Neelsen. Kedua teknik ditafsirkan dengan cara yang sama, tetapi mereka berbeda dalam dua elemen: dalam persiapan reagen utama dan di mana teknik Kinyoun tidak menggunakan panas.

Karena alasan ini juga dikenal sebagai Ziehl-Neelsen dalam Modifikasi Dingin, atau Pewarnaan Dingin Kinyoun. Ditunjukkan untuk warna Mycobacterium tuberculosis, Leprae mycobacterium, Mikobakteri atipikal, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris Dan Cyclosporras cayetanensis.

Perlu dicatat itu Nocardias Mereka dicelup dengan lemah dengan teknik ini karena mereka adalah sebagian alkohol asam, jadi untuk genre ini ada modifikasi metodologi.

Pada gilirannya, teknik Kinyoun telah dikombinasikan dengan teknik trikromik yang dimodifikasi oleh Didier untuk mendeteksi coccidios (Cryptosporidium parvum Dan Isospora belli) dan spora microsporidary (Enterocytozoon Bieneusi Dan Enchelitozoon intestinalis).

Dasar

Reagen utama pewarnaan adalah carbolfucsin atau fenicada fuchsin, yang memiliki sifat bergabung dengan asam karbolik yang ada di dalam dinding sel ksatria, kaya lipid (asam mikolik) dari mikobakteri dan parasit tertentu.

Persatuan ini tidak ditimbulkan oleh asam dekolor, oleh karena itu, mikroorganisme didefinisikan sebagai asam alkohol yang resisten.

Berbeda dengan teknik Ziehl-Neelsen-yang memperbaiki pewarna melalui panas-, dalam teknik Kinyoun, langkah ini tidak diperlukan, karena larutan fenicada fuchsin yang disiapkan mengandung konsentrasi fenol yang tinggi.

Itu bisa melayani Anda: agar Salmonella-Shigella

Fenol melarutkan bahan lipid dari dinding sel, yang memungkinkan masuknya pewarna carbolfucsin. Setelah pewarna menembus, ia diperbaiki meskipun dicuci dengan asam alkohol.

Dengan cara ini, mikroorganisme asam alkohol yang resisten mengambil warna merah yang khas, sedangkan segala sesuatu yang bukan alkohol asam berubah warna dan dicelup biru.

Teknik

Bahan

  • FUCHSIN FHOENICATed yang dimodifikasi.
  • Asam alkohol.
  • Methylene Blue.

Kinyoun foenicated fuchsina persiapan

  • Fuchsina dasar: 4 gr.
  • Fenol: 8 ml.
  • Alkohol (95%): 20 ml.
  • Air suling: 100 ml.

Fuchsin dasar dalam alkohol harus perlahan -lahan larut, terus mencampur. Selanjutnya, fenol mengkristal meleleh di kamar mandi pada suhu 56 ° C. Setelah dibubarkan, 8 mL ditambahkan ke larutan fuchsin yang sebelumnya disiapkan.

Persiapan asam alkohol

  • Asam klorida terkonsentrasi: 3 mL.
  • Etanol (95%): 97 ml.

Anda harus mengukur, bergabung dan mencampur.

Persiapan pewarna kontras biru metilen

  • Methylene Blue: 0.3 g.
  • Air suling: 100 ml.

Beratnya dan larut.

Teknik Pewarnaan Kinyoun

  • Siapkan apusan langsung dari sampel, yang dapat berupa dahak, cairan paru, sedimen urin, cairan serebrospinal atau feses, antara lain, atau dari suspensi mikroorganisme yang diperoleh dari koloni murni yang dikembangkan di media media.
  • Perbaiki noda dengan panas.
  • Tempatkan noda di jembatan pewarnaan dan tutupi dengan reagen fenicada fuchsin dari Kinyoun disiapkan. Diamkan selama 3 atau 5 menit.
  • Cuci dengan air suling.
  • Hiasi dengan alkohol asam selama 3 menit dan cuci lagi dengan air suling.
  • Hiasi lagi dengan alkohol asam selama 1 atau 2 menit sampai lebih mewarnai.
  • Cuci dengan air suling dan diamkan, menempatkan slide pada posisi vertikal.
  • Tutupi persiapan dengan metilen biru dan biarkan selama 4 menit.
  • Cuci dengan air suling dan biarkan udara kering.
  • Periksa 40x dan kemudian 100x.
Dapat melayani Anda: mikroskop lapangan yang jelas: karakteristik, suku cadang, fungsi

Jika Anda ingin meningkatkan dan mempercepat pewarnaan mikroorganisme asam alkohol yang resisten, 1 tetes zat pelembab ditambahkan (seperti Katak No. 7) hingga 30 atau 40 mL fuchsin fenicat dari Kinyoun.

Beberapa laboratorium mengubah pewarna kontras metilen biru karena hijau atau asam pikrat cerah. Yang pertama memberikan warna hijau ke latar belakang dan yang kedua menghasilkan warna kuning.

Teknik Kinyoun Khusus untuk Nocardias

Untuk meningkatkan pewarnaan bakteri gender Nocardia Modifikasi pewarnaan Kinyoun digunakan. Tekniknya adalah sebagai berikut:

  • Tutupi noda dengan fenicada fuchsina dari Kinyoun selama 3 menit.
  • Cuci dengan air suling.
  • Disesuaikan secara singkat dengan alkohol yang disiapkan 3% sampai lebih mewarnai.
  • Cuci lagi dengan air suling.
  • Tutupi persiapan dengan metilen biru dan tinggalkan ACT selama 30 detik.
  • Cuci dengan air suling dan biarkan udara kering.

Gabungan Teknik Fuchsina yang difokuskan dan trikromik dimodifikasi oleh Didier

Teknik ini direkomendasikan untuk analisis sampel tinja untuk mencari coccidios dan spora Microsporidium sp pada saat yang sama. Prosedur yang akan diikuti adalah sebagai berikut:

  • Tutupi noda dengan fenicada fuchsina dari Kinyoun selama 10 menit.
  • Lepaskan pewarna dan cuci dengan air suling.
  • Hiasi selama 30 detik dengan alkohol asam klorida.
  • Cuci lagi dengan air suling.
  • Tutup noda dengan larutan trikromik selama 30 menit pada suhu 37 ° C.
  • Cuci dengan air suling.
  • Hiasi selama 10 detik dengan alkohol asam asetat.
  • Cuci baunya selama 30 detik menggunakan etanol 95%.

Qa

Sebagai kontrol positif, noda disiapkan dengan strain Mycobacterium tuberculosis dan mereka dicat dengan reagen yang disiapkan untuk memverifikasi bahwa bakteri mengambil warna yang tepat (fucsia merah).

Itu dapat melayani Anda: gametoogenesis

Kontrol negatif juga dapat digunakan dengan menyiapkan noda dengan strain apa pun yang tidak tahan asam alkohol, sehingga memeriksa bahwa seluruh sampel mengambil warna kontras.

Teknik Kinyoun Dibandingkan dengan Teknik Ziehl-Neelsen

Teknik Kinyoun lebih sederhana karena ia menghilangkan perjalanan pemanasan, tetapi keuntungan utamanya adalah menghindari emisi uap, sangat beracun dan menyebabkan kanker jangka panjang. Oleh karena itu, pewarnaan Kinyoun lebih aman bagi personel yang bertugas melakukan pewarnaan.

Penting untuk memperhitungkan bahwa Anda harus berhati -hati bahwa reagen tidak bersentuhan langsung dengan kulit, karena mereka korosif dan perubahan warna mudah terbakar.

Adapun kerugian, apusan negatif tidak selalu menunjukkan bahwa mikroorganisme tidak ada. Selain itu, keberadaan detritus seluler dapat menyebabkan positif palsu, yang menghasilkan kebingungan dalam diagnosis.

Referensi

  1. Kimia klinis yang diterapkan. BK Kinyoun Kit. Cromakit pulih.adalah.
  2. Orozco-Rico, m. Pewarnaan Kinyoun dan dua coccidios dalam HIV. MD Medical Magazine. 
  3. Forbes, b., Sahm, d., Weissfeld, a. Diagnosis mikrobiologis Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.KE.