Semoga Grünwald-Giemsa Stain

Sampel leukemia myeloid kronis, dengan pewarnaan May Grünwald-Giemsa. Sumber: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Apa yang mungkin merupakan pewarnaan Grünwald-Giemsa?

Itu Semoga Grünwald-Giemsa Stain, o Pappenheim, adalah teknik pewarnaan diferensial yang mencampur reagen giemsa dan mungkin grünwald. Ini digunakan untuk diferensiasi sel darah normal dan abnormal dalam noda darah perifer dan sumsum tulang, serta untuk pewarnaan pemotongan histologis dan sampel sitologis.

Kedua reagen -Giemsa dan May Grünwald- berasal dari pewarnaan Romanowsky, sebuah teknik berdasarkan kombinasi asam dan pewarna basa.

Giemsa meningkatkan teknik dengan menstabilkan campuran eosin, metilen biru dan turunannya, dengan gliserol. Sebaliknya, Mei Grünwald menggunakan eosin dan metilen biru, menggunakan metanol sebagai pelarut. Kombinasi strategis ini telah memberikan hasil yang sangat baik.

Sementara dalam hal pengamatan morfologi sel bertindak mirip dengan warna Giemsa dan Wright, teknik ini meningkatkan pemurnian pewarnaan parasit di atas yang menyebabkan malaria, kejahatan chaga, leishmaniasis dan trikomoniasis.

Selain itu, ini telah terbukti sangat berguna untuk studi sitologis cairan spermatika. Tidak hanya disorot dengan menunjukkan karakteristik morfologis sperma, tetapi juga memungkinkan leukosit, sel epitel dan sel spermatogenesis akan sangat dibedakan.

Dasar

Teknik ini mengikuti dasar pewarnaan Romanowsky, di mana pewarna asam memiliki afinitas selektif untuk komponen sel dasar dan komponen asam menarik pewarna basa.

Dengan kata lain, kedua struktur sel dan pewarna memiliki beban listrik positif atau negatif, beban yang sama ditolak dan beban yang berbeda menarik.

Misalnya, pewarna dasar, seperti metilen biru, dimuat secara positif dan tertarik dengan struktur yang dimuat secara negatif. Itulah sebabnya pewarna ini pewarna inti yang kaya akan DNA dan RNA yang memiliki kelompok fosfat yang dimuat secara negatif.

Butiran dari basofilik tersegmentasi dan sitoplasma sel darah putih mononuklear yang mengandung ARN juga diwarnai.

Itu dapat melayani Anda: flora dan fauna jalisco: spesies representatif

Juga, pewarna asam memiliki beban negatif, sehingga berikatan dengan struktur yang dimuat secara positif seperti eritrosit dan butiran eosinofil yang tersegmentasi. Adapun butiran neutrofil tersegmentasi, kedua pewarna diatur.

Variasi pewarna

Dalam teknik ini kombinasi reaksi antara pewarnaan ortokromatik dan metakromatik hidup berdampingan. Ortochromatic (eosin dan methylene blue) difiksasi dengan struktur sel yang terkait dan memberikan warna stabil yang tidak bervariasi.

Di sisi lain, metakromatik (yang berasal dari metilen biru, biru dan biru b), warna aslinya bervariasi sekali disatukan dengan struktur spesifik, bahkan mungkin ada berbagai nuansa.

Akhirnya, langkah yang mengambil solusi Grünwald Mei membutuhkan keberadaan air, karena tanpa ini pewarna akan menembus struktur, tetapi tidak akan diperbaiki. Untuk terjadi, pewarna harus menjadi kutub atau ionisasi, dan dengan demikian dapat mengendapkan dan melihat struktur terkait.

Teknik

Bahan

• Lembar slide.
• Jembatan pewarnaan.
• Semoga solusi Grünwald.
• Pewarnaan Giemsa.
• Air sulingan.

Terkonsentrasi may pewarna grünwald

0,25 gr methylene eosin-blue (pewarna menurut Mei grünwald) dan larut dalam 100 mL metanol harus ditimbang. Kemudian persiapan dicampur selama 1 jam dan diamkan selama 24 jam. Setelah waktu, disaring.

Untuk menerapkan teknik ini, pewarna Grünwald Mei diencerkan sebagai berikut: Untuk 200 mL pewarna encer, 30 mL larutan terkonsentrasi diukur, 20 mL larutan buffer dan 150 mL air suling yang disesuaikan dengan pH 7.2-7.3. Selanjutnya, dicampur dan disaring.

Pewarnaan Giemsa terkonsentrasi

0,5 gr dari azur-eosin-peak metilen (pewarna menurut Giemsa), larut dalam 50 mL metanol dan tambahkan 50 mL gliserin.

Untuk menjalankan teknik, 1:10 diencerkan dengan larutan buffer dan diamkan selama 10 menit. Itu bisa disaring jika perlu.

Dapat melayani Anda: mesénquima

Persiapan larutan buffer pada pH 7.2

Mereka harus ditimbang:

• 40 mg di-hidrogen kalium fosfat (KH2PO4).
• 151 mg hidrogen di-syphotic phosphate 12-hidrat (Na2HPO4).

Kedua senyawa itu dilarutkan dalam 100 ml air.

Prosedur Toncion Sang Sanguine atau Bone

Ada dua modalitas: klasik dan cepat.

Modalitas klasik

• Tutupi bau selama 2 atau 3 menit dengan larutan grünwald Mei diencerkan.
• Cuci dengan air suling buffer untuk menghilangkan larutan sebelumnya.
• Tutup dengan solusi pencucian buffered yang sama dan tinggalkan selama 1 menit. Idenya adalah bahwa pewarna anterior dipasang pada struktur dan bahwa, pada saat yang sama, sel -sel terhidrasi.
• Tambahkan 12 tetes tingtur Giemsa encer pada air buffer dan tiup untuk mencampur dan homogenisasi. Diamkan selama 15 atau 20 menit.
• Cuci apusan dengan air suling buffered dan letakkan untuk mengering di udara.
• Fokus dan amati dalam mikroskop optik sel -sel darah pewarnaan menggunakan target 40x. Jika perlu, 100x dapat digunakan.

Mode cepat

• Tutupi noda dengan pewarna grünwald Mei diencerkan selama 1 menit.
• Cuci dengan air suling buffered.
• Tutup dengan air buffer dan diamkan selama 1 menit.
• Tempatkan pewarna giemsa encer dan biarkan selama 5 menit.
• Cuci dengan air suling buffered dan biarkan udara kering.

Teknik yang dijelaskan di sini adalah panduan penuntun, tetapi harus diperhitungkan bahwa prosedur dan waktu pewarnaan bervariasi sesuai dengan rumah komersial yang menjual reagen. Disarankan untuk mengikuti langkah -langkah yang ditunjukkan secara ketat oleh masing -masing rumah komersial.

Teknik pewarnaan cairan sperma diperpanjang

• Tutupi yang diperpanjang dengan lapisan halus dari solusi Mei Grünwald selama 4 menit.
• Lepaskan pewarna dan cuci dengan air suling.
• Tempatkan lapisan giessa encer (1:10) dalam air suling selama 15 menit.
• Lepaskan pewarna dan cuci dengan air suling.
• Biarkan kering dan amati di mikroskop.

Dapat melayani Anda: fermentasi butyric

Spesifikasi penting

Teknik ini menyatakan bahwa reagen dan solusi cuci memiliki pH disesuaikan dengan 7.2-7.3, sehingga afinitas pewarna oleh struktur sel tidak terdistorsi dan warna akhir yang diharapkan tidak bervariasi.

Aplikasi

• Teknik ini digunakan oleh laboratorium klinis untuk mewarnai gosok darah perifer dan sumsum tulang, potongan jaringan dan sitologi.
• Di bidang hematologis, teknik ini sangat penting dalam studi kelainan sel dalam hal bentuk, ukuran dan angka. Ini adalah alat yang sangat berharga untuk diagnosis penyakit tertentu, seperti leukemia dan anemia.
• Ini menyajikan utilitas yang luar biasa saat dicari parasit di bidang hematologis (Plasmodium sp Dan Cruzi Tripaosoma) atau histologis (Leishmanias sp).
• Adapun sitologi vagina, teknik ini sangat menguntungkan untuk pengamatan Trichomonas vaginalis. Ini adalah temuan penting, karena kehadirannya mensimulasikan lukisan karsinoma In situ Itu kemudian menghilang saat parasit dihilangkan.
• Ini telah menjadi alat yang ideal untuk mempelajari sampel sperma, karena memberikan informasi berharga tentang kualitas sperma. Data yang ditawarkannya harus dilakukan terutama dengan jumlah dan morfologi, serta sel -sel bersamaan yang mungkin ada dan yang sangat penting, seperti sel kuman, leukosit dan sel epitel dan sel epitel. Dengan analisis ini dimungkinkan untuk menggambarkan kelainan yang diamati pada sperma di kepala, leher, bagian tengah dan bagian utama. Selain itu, mereka juga dapat membantu menunjukkan kasus hosospermia (adanya sel darah merah) dan leukospermia atau piospermia (peningkatan jumlah leukosit dalam semen).

Referensi

1. Laboratorium Merck Kgaa. May Grünwald Eosina Blue Microscopy Methylene.
2. Pewarnaan May-Grünwald-Giemsa. Pulih dari es.Wikipedia.org.
3. Glass Chemicals Panreac Laboratory. Reagen untuk teknik histologis, hematologi dan mikrobiologi. Dipulihkan dari GlassChemicals.com.